引言   生物等效性（Bioequivalence）研究是仿制藥開發(fā)和申請中的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，美國食品、藥品監(jiān)督局（FDA）作為生物等效性研究的先行者和倡導(dǎo)者對其有深入的見解，本文從生物等效性和仿制藥的歷史講起，介紹了FDA對生物等效性研究的方法考量、試驗設(shè)計、評定標(biāo)準(zhǔn)以及數(shù)據(jù)遞交等，為國內(nèi)仿制藥企業(yè)的生物等效性研究提供參考和依據(jù)。

1. 生物等效性與仿制藥申請 

1.1 歷史沿革

仿制藥（Generic Drug）是指在劑型、安全性、劑量、給藥途徑、質(zhì)量、性能特點以及用途與品牌藥（Brand-name drug）完全相同或生物等效（BE，bioequivalent）的復(fù)制品。由于開發(fā)仿制藥的難度和成本都要遠(yuǎn)遠(yuǎn)小于新藥，其售價也要比品牌藥低很多。同時，除首仿藥有180天市場獨占權(quán)（Market exclusivity），一般的仿制藥也沒有市場和專利的保護(hù)。

早在20世紀(jì)四五十年代，仿制藥就已出現(xiàn)在美國市場。當(dāng)時的聯(lián)邦食品、藥品和化妝品法案（FD&C）中并沒有仿制藥的定義，而仿制藥由于其活性成分與品牌藥一致也不符合新藥（New drug）的定義，于是一些早期的仿制藥就“逍遙于法外”，不受FDA監(jiān)管便進(jìn)入了市場。

1962年的反應(yīng)停（Thalidomide）藥患事件和當(dāng)年通過的Kefauver-Harris修正案翻開了FDA歷史的新頁，藥品療效首次被列為FDA新藥審評的內(nèi)容之一。在Kefauver-Harris修正案的推動下，F(xiàn)DA發(fā)起了一項“藥品療效研究（Drug Efficacy Study）”，對1962年以前批準(zhǔn)的藥品重新進(jìn)行再評價。同時FDA要求仿制1962年后上市的新藥必須遞交完整的新藥申請（NDA），而仿制1962年前批準(zhǔn)的新藥可以采取簡化新藥申請（ANDA）（當(dāng)時的ANDA法規(guī)并不完備，這些仿制藥也很難獲批）。盡管這項舉措有效控制了進(jìn)入市場的仿制藥的安全性和療效，但也大大限制了工業(yè)界開發(fā)仿制藥的熱情。為此，F(xiàn)DA一方面采取“基于文獻(xiàn)的新藥申請政策（Paper NDA policy）”，即允許用發(fā)表的文獻(xiàn)以及橋接數(shù)據(jù)來支持仿制藥申請；另一方面開始重新研究并完善已運(yùn)用于1962年前上市新藥的仿制藥ANDA政策。

經(jīng)過多年努力，F(xiàn)DA終于在1984年通過了藥品價格競爭與專利期補(bǔ)償法案（The Drug Price Competition and Patent Term Restoration Act），通常也被稱作Hatch-Waxman法案。Hatch-Waxman法案將生物等效性看做藥品安全性和有效性的良好替代指標(biāo)，仿制藥的申請者不再需要重復(fù)動物和臨床試驗，而只需證明仿制藥與參照藥（RLD，Reference Listed Drug）之間的生物等效性。Hatch-Waxman法案具有劃時代的意義，據(jù)此修訂的簡化和新藥申請程序一直被沿用至今。
 
1.2 治療等效、藥學(xué)等效和生物等效

藥學(xué)等效（Pharmaceutical equivalent）、生物等效和治療等效（Therapeutic equivalent）都是ANDA中常見的概念。

藥學(xué)等效指的是兩種藥品擁有相同的藥物活性成分、劑型、給藥途徑和規(guī)格（或濃度），同時活性成分的用量一致，并且符合相同的、藥典或其他適用的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)（例如規(guī)格、質(zhì)量、純度和鑒定）。生物等效指的是在類似試驗條件給予相同劑量的兩種藥學(xué)等效藥品，呈現(xiàn)可比的生物利用度（BA，Bioavailability，即藥物活性成分被作用部位吸收并利用的速率和程度）。治療等效指的是兩種藥品既滿足藥學(xué)等效，又能在按照藥品說明書使用的情況下?lián)碛邢嗤呐R床療效和安全性。FDA認(rèn)為生物等效性是仿制藥療效和安全性的優(yōu)良替代指標(biāo)，因此，簡單來講，治療等效就是要同時滿足藥學(xué)等效和生物等效。

ANDA的申請者首先要通過原料藥和制劑化學(xué)、生產(chǎn)和控制（CMC）的數(shù)據(jù)來證明仿制藥與參比制劑在藥學(xué)上等效，其次要通過體外和/或體內(nèi)研究來證明其生物等效。仿制藥被批準(zhǔn)會獲得一個“療效等效性”編碼，錄入FDA的《經(jīng)治療等效評價批準(zhǔn)的藥品》（通常稱為“橙皮書”）中。
 
1.3生物等效性的研究方法

很多方法都可以被用來測量生物利用度或證明生物等效性。FDA根據(jù)一般情況和優(yōu)先度推薦的研究方法依次是：1.體內(nèi)藥代動力學(xué)研究（血藥濃度和時間關(guān)系）或已經(jīng)與體內(nèi)BA建立對應(yīng)關(guān)系的體外實驗；2.體內(nèi)試驗（藥物排泄和時間關(guān)系）；3.擁有及時藥效指標(biāo)的體內(nèi)研究；4.臨床對比試驗；5.體外溶出度實驗。具體方法的選擇還需要取決于試驗?zāi)康?、檢測方法是否可用、藥物本身的特性以及人體試驗的風(fēng)險-獲益情況?？傊?，F(xiàn)DA要求申請者選擇準(zhǔn)確性、靈敏度和可重復(fù)性最高的方法來證明生物等效性。

FDA在2013年發(fā)布了《以藥動學(xué)為終點評價指標(biāo)的仿制藥生物等效性研究指導(dǎo)原則》（草案）。該指導(dǎo)原則修訂并替代了兩個既往指導(dǎo)原則（即《口服制劑生物利用度/生物等效性（BA/BE）研究的總體考慮》（2003）和《食物對生物利用度的影響以及餐后生物等效性研究技術(shù)指導(dǎo)原則》）中有關(guān)仿制藥BE研究的內(nèi)容。除此之外，為了幫助申請者更好地選擇BE研究方法，F(xiàn)DA建立了“個例仿制藥開發(fā)指導(dǎo)意見數(shù)據(jù)庫”。從2007年至今，F(xiàn)DA總共已經(jīng)發(fā)布了1523個品種的仿制藥開發(fā)意見。另外FDA還建立了“溶出度方法數(shù)據(jù)庫”來指導(dǎo)美國藥典（USP）中沒有涵蓋的體外溶出度實驗方法。

2.體內(nèi)藥代動力學(xué)BE研究

2.1 試驗設(shè)計和受試者

對于經(jīng)血液循環(huán)作用全身的藥物，以藥代動力學(xué)指標(biāo)為終點的體內(nèi)試驗是最可靠的BE評價方法。FDA推薦的標(biāo)準(zhǔn)設(shè)計為單劑量、雙周期、雙序列（2X2）隨機(jī)交叉試驗，即每個受試者在兩個服藥周期分別服用不同的藥物（先試驗藥再參比制劑，或先參比制劑再試驗藥），兩個周期之間設(shè)定有清洗期，以保證第一周期服用的藥物在下次給藥前全部排除，清洗期至少是三倍時長于藥物在血漿或尿液中的半衰期。特殊情況也可以采用平行試驗設(shè)計，例如藥物的半衰期時間較長。對于受試者，F(xiàn)DA 建議一般在24-36名健康成年人身上進(jìn)行，但如果出于安全性原因（例如毒副反應(yīng)高的藥物），可選擇患者進(jìn)行試驗。除此之外受試人群必須能代表試驗藥的適用人群（年齡、性別和種族等）。除說明書明確規(guī)定需空腹給藥的，一般FDA都要求在空腹和餐后兩種情況進(jìn)行BE研究。
 
2.2生物分析方法

選擇合適的生物分析方法來檢測血液、尿液中的藥物（代謝產(chǎn)物）濃度在BE試驗中十分重要。分析方法必須準(zhǔn)確、敏感并且可重復(fù)。如果單劑量給藥后的藥物濃度太低無法檢測，則可以采取用單劑量的兩倍或數(shù)倍劑量給藥，超出說明書給藥劑量的情況需要遞交調(diào)研性新藥申請（IND）。所有的分析方法都必須經(jīng)過驗證。FDA在2001年5月份發(fā)布的指南文件《工業(yè)指南——生物分析方法驗證》詳細(xì)闡述了人體藥代動力學(xué)試驗中生物分析方法的驗證，基本的驗證元素包括準(zhǔn)確度、精密度、選擇性、靈敏度、可重復(fù)性和穩(wěn)定性。
 
2.3 BE的判定標(biāo)準(zhǔn)
 
BE的判定標(biāo)準(zhǔn)是基于藥代動力學(xué)參數(shù)的統(tǒng)計分析結(jié)果。從藥物濃度-時間曲線可以得到最重要的兩個動力學(xué)參數(shù)：曲線下面積（AUC，Area Under Curve）和藥物峰濃度Cmax，分別反映藥物吸收程度和速率。FDA采用兩次單側(cè)檢驗的程序（Two one-sided tests procedure）對受試制劑和參比制劑的動力學(xué)參數(shù)進(jìn)行分析。如果兩種制劑AUC和Cmax的幾何均值比的90%置信區(qū)間落于80%-125%之間，F(xiàn)DA則認(rèn)定兩種制劑生物等效。這里得到的生物等效被稱為平均生物等效性，適用于大部分的BE試驗。FDA另外還建立了群體生物等效性和個體生物等效性兩個概念，來處理群體或個體間的變化。FDA在2001年發(fā)布的指南文件《工業(yè)指南——建立生物等效性的統(tǒng)計學(xué)方法》詳細(xì)闡述了FDA從統(tǒng)計學(xué)方面對生物等效性的考慮。

3. ANDA中BE研究數(shù)據(jù)遞交

3.1 法規(guī)要求

證明仿制藥與參比制劑之間生物等效是ANDA審評通過的關(guān)鍵。FDA在21CFR 314.1 中規(guī)定，除非滿足FDA生物等效性豁免的條件，ANDA申請中必須包含用來證明生物等效性的完整試驗報告和全部數(shù)據(jù)。對于同一處方藥物產(chǎn)品進(jìn)行的其他所有BE研究結(jié)果（無論是否支持生物等效）都應(yīng)該以完整報告或總結(jié)報告的形式遞交。對于“同一處方藥物”的解釋以及具體適用范圍FDA在2009年頒布的《ANDA中生物等效性數(shù)據(jù)資料提交指導(dǎo)原則》中有詳細(xì)闡述。
 
3.2 數(shù)據(jù)遞交的內(nèi)容和格式

人體BE試驗數(shù)據(jù)的遞交的關(guān)鍵主要包括四個部分：體外溶出度實驗、生物分析方法、臨床試驗報告以及結(jié)果的統(tǒng)計分析。這些數(shù)據(jù)主要體現(xiàn)在ANDA申請資料中的Module 2（CTD總結(jié)）和Module 5（臨床試驗報告）中（圖1）。Module 2主要是對BE研究的總結(jié)和結(jié)果匯總。而Module 5包含了完整的試驗報告和相關(guān)信息。

另外，F(xiàn)DA官網(wǎng)提供了可編輯的PDF或Word形式的BE數(shù)據(jù)總結(jié)表格模板（Model Bioequivalence Summary Data Tables）來幫助ANDA申請者匯總和遞交BE試驗設(shè)計、體內(nèi)/體外試驗結(jié)果、體外溶出度結(jié)果等。

 
結(jié)語

國內(nèi)的仿制藥質(zhì)量一致性評價工作正如火如荼，一致性評價的核心就是從藥學(xué)和生物學(xué)方面證明仿制藥與原研藥的等效性。一致性評價工作從小的層面來看，這是一次全面的仿制藥企業(yè)洗禮。從大的層面來看，是中國整個仿制藥工業(yè)水平的提升契機(jī)。因此，借鑒和學(xué)習(xí)FDA在仿制藥和生物等效性研究方面的法規(guī)體系和經(jīng)驗思想對我們的一致性評價工作有著極為重要的意義。