- 細(xì)胞&基因療法近些年發(fā)展突飛猛進(jìn)，為很多難治性疾病提供了可能性。隨著基因轉(zhuǎn)導(dǎo)和修飾技術(shù)、遞送載體系統(tǒng)、細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)等領(lǐng)域的快速發(fā)展，細(xì)胞&基因治療取得了突破進(jìn)展，為難治性疾?。ㄓ绕涫呛币娺z傳性疾病）提供了全新的治療理念和思路。細(xì)胞治療是指通過生物工程技術(shù)，利用患者自體或異體某些具有特定功能的細(xì)胞特性，經(jīng)體外擴增、特殊培養(yǎng)處理后，使這些細(xì)胞具有增強免疫、殺死病原體和腫瘤細(xì)胞的功能，從而達(dá)到治療疾病的目的。
腫瘤免疫細(xì)胞治療根據(jù)細(xì)胞類別進(jìn)行分類，目前主要包括：CAR-T（嵌合抗原受體T細(xì)胞）TCR-T（工程T細(xì)胞受體T細(xì)胞）CAR-NK（嵌合抗原受體NK細(xì)胞）TIL（腫瘤浸潤淋巴細(xì)胞）CAR-M（嵌合抗原受體巨噬細(xì)胞）等 - 免疫細(xì)胞的復(fù)雜性：體內(nèi)擴增個體化，異質(zhì)性產(chǎn)量小及批次有限制備工藝復(fù)雜起始材料差異大生物學(xué)效力以及安全性評價復(fù)雜
CGT藥物藥理藥效學(xué)研究- 安全藥理學(xué)研究藥物在治療范圍內(nèi)或以上的劑量時對生理功能潛在的非期望影響；一般包括對中樞神經(jīng)系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)的影響；根據(jù)產(chǎn)品特點，可能需要補充對其他器官系統(tǒng)的研究。
- 體外藥效學(xué)研究細(xì)胞治療（如CAR-T）的效力檢測：腫瘤殺傷率或增殖抑制率IFN-γ的表達(dá)量免疫細(xì)胞表型變化CAR-T的制備與評價
案例：質(zhì)粒載體構(gòu)建將PD-1 shRNA整合到CAR質(zhì)粒中，再通過慢病毒載體轉(zhuǎn)導(dǎo)進(jìn)T細(xì)胞，獲得具有PD-1沉默功能的CAR-T細(xì)胞。結(jié)果表明，PD-1的有效沉默顯著抑制了腫瘤微環(huán)境的免疫抑制作用，延長了CAR-T細(xì)胞的活化時間，從而產(chǎn)生了較長的腫瘤殺傷作用。PD-1沉默的CAR-T細(xì)胞顯著延長了皮下前列腺和白血病異種移植小鼠的存活期。證明PD-1沉默技術(shù)是促進(jìn)CAR-T細(xì)胞對皮下前列腺和白血病異種移植物治療效果的合適解決方案[1]。此實驗中質(zhì)粒測序工作完全由美迪西完成。
Plasmid containing PD-1 knockdown sequence[4]案例：CAR-T細(xì)胞殺傷試驗
CAR-T細(xì)胞殺傷實驗顯示CAR-T細(xì)胞依賴性殺傷較Mock-T細(xì)胞增加 - 體內(nèi)藥效學(xué)研究細(xì)胞治療受試物可采用健康志愿者捐贈的血液制備 可采用動物來源替代產(chǎn)品進(jìn)行一些概念驗證性研究（Proof-of-Concept） 非臨床試驗受試物和臨床用樣品的異同均應(yīng)在新藥申報時予以說明基因治療受試物考慮生產(chǎn)過程、關(guān)鍵質(zhì)量特征（如滴度）、臨床擬用制劑等因素 如果有種屬特異性，應(yīng)考察評估受試物在非臨床研究中的活性 若載體采用了表達(dá)性標(biāo)簽，應(yīng)分析標(biāo)簽對非臨床試驗支持性的影響檢測方法和評價指標(biāo)生物發(fā)光成像（Bioluminescent Imaging，BLI） 流式細(xì)胞術(shù)：檢測動物體內(nèi)腫瘤細(xì)胞的數(shù)量 流式細(xì)胞術(shù)、ELISA、MSD：腫瘤相關(guān)的細(xì)胞因子的變化相關(guān)參數(shù)：瘤體積、瘤重、動物體內(nèi)腫瘤細(xì)胞定植部位和動物中位存活期
- 模型資源：細(xì)胞治療藥效評價免疫健全鼠 + 鼠源腫瘤細(xì)胞（同源小鼠模型） 免疫缺陷鼠 + 人源腫瘤細(xì)胞（CDX模型） 免疫缺陷鼠 + 臨床腫瘤組織（PDX模型）免疫重建鼠（PBMC和HSC）+ 人源腫瘤細(xì)胞（人源化小鼠模型）免疫缺陷鼠 + 人源腫瘤細(xì)胞（大鼠腫瘤模型）溶瘤病毒藥效評價免疫健全鼠 + 鼠源腫瘤細(xì)胞（同源小鼠模型） 免疫缺陷鼠 + 人源腫瘤細(xì)胞（CDX模型） 免疫缺陷鼠人免疫重建（PBMC和HSC）+ 人源細(xì)胞（人源化小鼠模型）原位模型及動物手術(shù)（原位模型）核酸藥物藥效評價免疫缺陷鼠 + 人源腫瘤細(xì)胞（CDX模型） 免疫缺陷鼠 + 臨床腫瘤組織（PDX模型） 免疫健全鼠 + 鼠源腫瘤細(xì)胞（同源小鼠模型）轉(zhuǎn)基因免疫健全鼠 + 鼠源腫瘤細(xì)胞（轉(zhuǎn)基因小鼠模型）免疫重建鼠（PBMC和HSC）+ 人源腫瘤細(xì)胞（人源化小鼠模型）原位模型及動物手術(shù)（原位模型）案例：免疫系統(tǒng)重建人源化小鼠模型
Raji-luc熒光素標(biāo)記淋巴瘤細(xì)胞誘導(dǎo)的hPBMC免疫系統(tǒng)重建小鼠藥效模型的藥效研究案例：雙特異性CAR-T藥效研究
雙靶點CAR-T藥物的藥效研究
CGT藥物藥代動力學(xué)研究- 藥代動力學(xué)研究考慮要點暴露量：基因治療產(chǎn)品應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品具體特點考慮非臨床研究中的實際暴露情況進(jìn)行分析評價 生物分布：基因治療產(chǎn)品生物分布是基因治療產(chǎn)品在體內(nèi)靶組織和非靶組織的分布、存續(xù)和清除脫落：脫落分析應(yīng)包括對其排出體外成分感染能力的檢測藥代（生物分布）檢測技術(shù)成像技術(shù) 流式細(xì)胞術(shù)免疫組化技術(shù)定量PCR技術(shù)等案例：肺部細(xì)胞治療分布的檢測
qPCR和流式細(xì)胞術(shù)得到的檢測結(jié)果一致
CGT藥物生物分析- 溶瘤病毒產(chǎn)品的生物分析要素
病毒載體類產(chǎn)品的生物分析要素
細(xì)胞治療類產(chǎn)品的生物分析要素
LNP-mRNA治療類產(chǎn)品的生物分析要素
寡核苷酸類產(chǎn)品的生物分析要素
基因編輯產(chǎn)品的生物分析要素
美迪西支持CGT產(chǎn)品的系列分析技術(shù)平臺PK/TK/BD
? 反轉(zhuǎn)錄熒光定量PCR（RT-qPCR）
? 定量PCR（qPCR）
? 數(shù)字微滴（ddPCR）
? 分子雜交-酶聯(lián)分析（H-ELISA）
? 分子雜交-電化學(xué)發(fā)光分析（H-ECL）
? 支鏈DNA（bDNA）免疫原性
? ELISA
? ECL
? Cell-based Assay
? 抗體阻斷
? ELISPOT表達(dá)產(chǎn)物（影響）
? mRNA水平：反轉(zhuǎn)錄熒光定量PCR（RT-qPCR）
? mRNA水平敲降：反轉(zhuǎn)錄熒光相對定量PCR（RT-qPCR）
? 蛋白水平：ELISA,FIA,ECL,Western blotting免疫毒性
? Cytokines：FACS CBA,ECL,Luminex
? Complements：Sigle-plex for Complements美迪西CGT藥物生物分析服務(wù)經(jīng)驗:CAR-T、CAR-NK等均有成功支持獲批IND的經(jīng)驗 溶瘤病毒、寡核苷酸、病毒載體類等均有成功支持獲批IND的經(jīng)驗與數(shù)家知名藥企在LNP-mRNA領(lǐng)域有長期的合作關(guān)系美迪西CGT藥物生物分析服務(wù)優(yōu)勢：擁有自主知識產(chǎn)權(quán)的現(xiàn)成通用型的NK細(xì)胞的生物分析方法 擁有自主知識產(chǎn)權(quán)的現(xiàn)成通用型的T細(xì)胞的生物分析方法擁有自主知識產(chǎn)權(quán)的現(xiàn)成通用型的干細(xì)胞的生物分析方法
CGT藥物非臨床安全性評價 - 細(xì)胞治療藥物的非臨床安全性研究主要針對藥物潛在的安全性風(fēng)險而設(shè)計展開。在毒理學(xué)研究中，應(yīng)對基因治療產(chǎn)品進(jìn)行全面的安全性分析評估，必要時還應(yīng)評估導(dǎo)入基因的表達(dá)產(chǎn)物的安全性。基因治療產(chǎn)品應(yīng)能在相關(guān)動物種屬中有效導(dǎo)入/暴露。細(xì)胞治療（如CAR-T細(xì)胞）的非臨床安全性風(fēng)險主要包括：細(xì)胞因子釋放綜合征（CRS）可逆的神經(jīng)毒性B細(xì)胞減少非腫瘤靶向毒性（on-target/off-tumor）移植物抗宿主病(GVHD)成瘤性/致瘤性等CGT藥物非臨床安全性評價內(nèi)容：一般毒理學(xué)生殖毒性神經(jīng)毒性復(fù)制型病毒風(fēng)險免疫原性和免疫毒性遺傳毒性致癌性局部耐受性參考文獻(xiàn)：
[1] Yi-Ju Chen, et al. CAR-T: What Is Next? Cancers. 2023 Jan 21;15(3):663.doi: 10.3390/cancers15030663.
[2] Ana Rosa Saez-Iba?ez, et al. Landscape of cancer cell therapies: trends and real-world data. Nat Rev Drug Discov. 2022 Sep;21(9):631-632. doi: 10.1038/d41573-022-00095-1.
[3] Leisheng Zhang, et al. CAR-NK cells for cancer immunotherapy: from bench to bedside. Biomark Res. 2022 Mar 18;10(1):12. doi: 10.1186/s40364-022-00364-6.
[4] Jing-E Zhou, et al. ShRNA-mediated silencing of PD-1 augments the efficacy of chimeric antigen receptor T cells on subcutaneous prostate and leukemia xenograft. Biomed Pharmacother. 2021 May;137:111339. doi: 10.1016/j.biopha.2021.111339.
服務(wù)案例
