- 近年來，抗體類藥物（如單抗、雙抗、ADC等）發(fā)展迅速，在多個疾病研究領域均有重磅產品陸續(xù)上市，抗體藥物研發(fā)受到越來越多的關注。美迪西在抗體藥物的一站式研發(fā)服務方案制定中與客戶深入交流，將每一個案例的特點與多年實戰(zhàn)經驗和技術積累相結合，謹慎地將優(yōu)質實驗方案與結果交到客戶手上。美迪西可以提供抗體全流程服務，包括：藥物發(fā)現(xiàn)、CMC研究服務、符合GLP規(guī)范的綜合性臨床前研究服務（藥效學研究、藥代動力學評價和安全性評價等）；以合規(guī)、高效、高質的服務助力客戶產品順利獲批等。
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Overview of the natural function of antibodies[1]
01 抗體藥物開發(fā)
- 美迪西抗體發(fā)現(xiàn)服務平臺匯聚了多樣化的先進技術——雜交瘤技術、單B細胞技術、抗藥物抗體制備技術等，為全球客戶提供了高效、精準的抗體研發(fā)解決方案。1 雜交瘤技術依托超10年的定制化抗體生產經驗和專業(yè)的抗體藥物研發(fā)團隊，美迪西雜交瘤研發(fā)服務可提供多種免疫方法（蛋白、多肽、小分子化合物、全細胞），滿足客戶的多樣化需求。具有10年以上的定制化抗體生產經驗，以及經驗豐富的抗體藥物研發(fā)團隊，美迪西建立了抗體藥物開發(fā)平臺。美迪西雜交瘤研發(fā)服務可提供多種免疫方法（蛋白、多肽、小分子、全細胞），確保滿足客戶需求。
用于先導化合物識別的雜交瘤技術:抗原的制備免疫接種和檢測滴度 6-8周 亞克隆的融合篩選（ELISA、FACS結合和阻斷試驗、功能試驗） 4-6周抗體測序 2周案例：Nectin-4抗體發(fā)現(xiàn)ELISA結合試驗數(shù)據(jù)
基于流式細胞術的細胞結合試驗數(shù)據(jù)
- 2 單B細胞抗體制備美迪西提供單B細胞抗體制備技術服務，包括單B細胞分選和單B細胞Ig基因轉錄、擴增、測序等。單B細胞抗體制備技術是目前新型、高效的抗體發(fā)現(xiàn)方法之一，具有速度快、通量高、以及抗體重輕鏈可變區(qū)天然配對的優(yōu)勢。
單B細胞抗體制備流程
案例：通過單B技術鑒定Nectin-4抗體
美迪西通過其抗體發(fā)現(xiàn)平臺，成功為客戶篩選并鑒定了針對Nectin-4的特異性抗體。ELISA結合實驗和流式細胞術細胞結合實驗數(shù)據(jù)均表明，這些抗體具有良好的結合活性和特異性。
美迪西案例
Nectin-4 Mouse Serum Titer
Nectin-4 (4-1) Sorting Single B Cell
Nectin-4 (4-6) Sorting Single B Cell
- 3 抗藥物抗體制備高靈敏度及多樣性的多克隆抗藥物抗體可作為免疫原性研究中的陽性參照物，模擬ADA在人體中產生的情況，同時也可以特異性檢測體內抗體藥水平，是藥代動力學研究的重要試劑。因此，抗藥物抗體作為抗體藥物研發(fā)必備工具試劑，其不但是臨床申報必不可少的試劑之一，在臨床階段也有十分廣泛的應用。美迪西在ADA開發(fā)方面具有豐富的經驗，已成功交付了100多份訂單，可提供高親和力和特異性的多克隆抗藥物抗體開發(fā)服務，服務周期短，開發(fā)成本低。美迪西案例一
血清效價
純化后抗體效價
美迪西案例二：ADC藥物
血清滴度
ADA滴度
- 4 納米抗體制備納米抗體諸多方面均優(yōu)于傳統(tǒng)抗體?；隈効苿游镏劓溈贵w的VHH單域抗體的特殊結構，兼具傳統(tǒng)抗體與小分子藥物的優(yōu)勢，幾乎完美克服了傳統(tǒng)抗體的開發(fā)周期長，穩(wěn)定性較低，保存條件苛刻等缺陷，逐漸成為新一代治療性生物醫(yī)藥與臨床診斷試劑中的新興力量。相比于常規(guī)抗體，納米抗體的優(yōu)勢有：分子量小，可穿透血腦屏障；原核或真核系統(tǒng)中高表達；特異性強，親和力高；對人的免疫原性弱等。美迪西生物提供駝科動物VHH抗體文庫構建服務，包括抗原的制備，免疫，抗體文庫菌的構建以及納米抗體的淘選，ELISA驗證等相關實驗。
Nanobody production scheme using a phage display library[3]
02 抗體藥物體外研究
- 抗體類藥物的活性測定是指對藥物的有效成分、含量及藥物效價進行測定，在藥物研發(fā)及質量控制中至關重要，是探索藥物作用機制（MOA），提供藥物IND申報依據(jù)的重要手段。抗體藥物在與其特定靶點結合后，通過激活或阻斷細胞因子等信號傳導、補體系統(tǒng)活化及細胞殺傷等生物學作用發(fā)揮治療效果。隨著藥物高通量篩選平臺的不斷建立與生產規(guī)模的不斷放大，基于細胞系的體外分析方法，例如依據(jù)藥物作用機制構建的報告基因細胞株更是因靈敏度高，檢測周期短，重復性好且操作簡單而被廣泛應用于新藥開發(fā)的過程中。體外藥理藥效分析需要根據(jù)抗體特點，靶點特性來設計相應實驗，分析方法主要包括基于流式、細胞成像的細胞分析；基于ELISA，Luminex等可溶性蛋白的分析。
- 1 結合實驗 Binding assay (FACS, ELISA, SPR)
Dose-dependent binding of Inetetamab (anti-HER2) with HCC1954 cells were tested through FACS, the data showed that Inetetamab binds with HCC1954 cells with EC50 of 6.4 nM.
Dose-dependent binding of Inetetamab (anti-HER2) with human HER2 protein were tested through ELISA, the data showed that Inetetamab binds with HER2 protein with EC50 of 97 nM.已驗證的靶點：PD-1, PD-L1, VEGF, Nectin1, Nectin2, Nectin3, Nectin4, NECL1, NECL2, NECL3, NECL4, NECL5, EPHA1, EPHA2,EPHA3, EPHA4, EPHA5, INSR, IGF-1R, HSA, FcRN, FcRI, FcRII, FcRIII, C1q, Factor B, HER2, Transferrin, EPCR, STAT3, STAT5,STAT1, 4-1BB, SHP2, ATIII, EGFR, gp1等。
Eylea binding with hVEGF
BEOVU binding with hVEGF
BB-1701 binding with hHER2
DS8201 binding with hHER2 - 2 抗體的功能性實驗
Raji cells were mixed with human PBMCs, and different doses of Rituximab was added to induce ADCC, the killing of raji cells were detected through FACS(CFSE labeling of raji).
Raji cells were mixed with human AB serum, and different doses of Rituximab was added to induce CDC, the killing of raji cells were detected through FACS(PI staining of raji).
B cells were treated with Teliacicept and induced with Baff for 72 hours, H3-thymidine incorporation were analyzed through scintillation counting.
T cells were treated with compound A and induced with ICOSL for 72 hours, H3-thymidine incorporation were analyzed through scintillation counting. - 3 細胞因子釋放實驗使用抗體A/IgG1和抗CD3/LPS處理人PBMC細胞25小時（液相或固相），通過Luminex試劑盒分析TNFα水平. 按照ICH指導原則測定細胞因子釋放，其中必須測試的因子有IL-2、IL-6、IL-10、IFN-γ和TNF-α。使用受試抗體處理PBMC細胞，至少測試3種。受試抗體的呈現(xiàn)形式包括固相和液相。ELISA、Luminex、CBA 和 MSD 方法可用于檢測細胞因子。 OKT3用作陽性對照。該測定的目的是評估潛在的抗體誘導細胞因子釋放效應，以防止臨床試驗中發(fā)生強細胞因子釋放風暴。
03 抗體藥物的CMC研究
- 美迪西可提供抗體藥物工藝開發(fā)和制劑研發(fā)服務。在確保研發(fā)質量的基礎上，美迪西團隊通過嚴謹?shù)脑囼灧桨冈O計（DOE）、專業(yè)化的研發(fā)技術、標準化的項目管理、規(guī)范化的試驗操作、高效的多方溝通，持續(xù)助力客戶的抗體藥物研發(fā)。
- 洛啟生物LQ036——重組抗IL-4Rα單域抗體霧化液2022年2月，洛啟生物LQ036——重組抗IL-4Rα單域抗體霧化液(畢赤酵母)的IND正式獲得CDE批準。LQ036是一款針對中重度哮喘治療的吸入式納米抗體藥物。在LQ036的研發(fā)過程中，美迪西依托其吸入制劑研發(fā)平臺，參考國內外吸入制劑的指導原則并結合各國申報要求，為LQ036制定專門的吸入制劑吸入特性指標研究方案，協(xié)助LQ036順利完成了中國NMPA和澳洲TGA申報材料的準備，并成功獲批。
04 抗體藥物藥效學評價
- 抗體的動物體內藥效試驗是抗體藥物研究中一項重要的藥理參數(shù)，直接反映了抗體的功效并影響臨床試驗設計。美迪西致力于為客戶提供成熟的評估抗體體內藥效的腫瘤模型，在AAALAC認證的環(huán)境下完成模型動物的建模和飼養(yǎng)，并以GLP-like的高標準完成相關藥效學評價試驗。美迪西多年來深耕動物領域，為藥物研發(fā)提供合適的動物模型，可提供多種用于評估抗體藥物的腫瘤模型（包括PDXO模型）及非腫瘤模型，在AAALAC認證的環(huán)境下完成模型動物的建模和飼養(yǎng)，并以GLP-like的高標準完成相關藥效學評價試驗。多種實驗動物：嚙齒類：小鼠/大鼠、兔子非嚙齒類：比格犬、小型豬、非人靈長類動物美迪西案例: CD3+ Bispecific Antibody
美迪西案例: CD3+ Bispecific Antibody
05 抗體藥物藥代動力學評價
- 美迪西在抗體藥物體內分析中可提供多種測檢測方法，通過分析動物體內采集的血漿/血清樣本，為客戶提供可靠優(yōu)質的PK數(shù)據(jù)。美迪西案例: Pharmacokinetics of YYB-101 in cynomolgus monkeys在四只雄性食蟹猴中單次靜脈注射 YYB-101（劑量為10 mg/kg）后，研究其藥代動力學特征。血清Tmax為2 h，Cmax為221.57 μg/mL，AUC(0–∞)為94 802.96 μg/mL*h。 t1/2Z 約為 21.7 天，清除率為 0.11 mL/kg/h。這項實驗是通過美迪西進行的。
Pharmacokinetic profile of YYB-101 in cynomolgus monkeys[4]
美迪西案例：Anti-drug antibodies of YYB-101 in cynomolgus monkeys在每天服用YYB-101（劑量為 50mg/kg ）的第一天，在一只雌性猴子中檢測到抗藥物抗體，但在第 29 或 85 天從該動物收集的樣本中未檢測到抗藥物抗體。僅在 1 只動物中檢測到抗藥物抗體。單一時間點，幾乎沒有觀察到與正常組織的交叉反應。 這項研究通過美迪西進行?；谶@些結果，一項針對晚期實體瘤患者的 I 期臨床研究正在進行中 (NCT02499224)。
06 抗體藥物安全性評價
- 美迪西毒理研究部遵循ICH指導原則S6和S9，結合每一個項目的具體情況定制個性化的安全性評價方案，提供符合NMPA、FDA、OECD、TGA等國際GLP標準的安全性評價服務，包括單次和重復給藥毒性試驗（伴隨毒代動力學研究) 安全藥理（包括組織交叉反應）免疫原性檢測
- 美迪西案例1: Toxicokinetics of YYB-101 in cynomolgus monkeys靜脈注射YYB-101后，YYB-101的平均全身暴露量（AUC0-168h）和Cmax值隨劑量成比例增加。在每周輸注 YYB-101 四次后，YYB-101 的平均血清峰濃度和谷濃度趨于穩(wěn)態(tài)。最后一次給藥后 63 天，康復動物的血清濃度可量化（第 22 天起約為 Cmax 的 2.8%）。重復靜脈注射YYB-101后，全身暴露量（AUC0-168h）增加，累積率為2.38至2.95。這項研究通過美迪西進行的。
Toxicokinetic parameters on days 1 and 22 following intravenous infusion of YYB-101 at 10, 50, or 200 mg/kg perday in cynomolgus monkeys[4]
美迪西部分助力抗體項目案例
- BAT6021注射液和BAT6005注射液2021年9月，百奧泰BAT6021注射液和BAT6005注射液創(chuàng)新藥接連獲批臨床，在腫瘤治療領域取得新進展。BAT6021和BAT6005是百奧泰開發(fā)的抗TIGIT單克隆抗體，用于腫瘤治療。作為長期合作伙伴，美迪西先后為百奧泰創(chuàng)新藥BAT6021、BAT6005提供（包括藥代和安全性評價在內的）綜合性臨床前研究服務，為百奧泰新藥項目的臨床獲批助力。
- BAT7104注射液2021年10月，百奧泰PD-L1/CD47雙抗BAT7104注射液獲臨床試驗默示許可，本次獲批的適應癥為晚期惡性腫瘤。BAT7104是靶向PD-L1/CD47的雙特異性抗體藥物，旨在抑制PD-1/PD-L1和CD47/SIRP-α途徑。美迪西作為百奧泰長期合作伙伴，有幸在BAT7104注射液的研發(fā)中與百奧泰合作，在GLP的實驗室環(huán)境和操作規(guī)范下，完成了BAT7104注射液的（包括藥代動力學和安全性評價在內的）綜合性臨床前研究服務，為BAT7104注射液高效、高質的獲批臨床提供了專業(yè)保障。
- JYB19042022年5月，濟民可信旗下子公司江蘇濟燁生物制藥有限公司lgE抗體藥物JYB1904注射液獲批臨床。JYB1904是一款新型抗IgE重組人源化單克隆抗體靶向治療藥物。JYB1904注射液具有優(yōu)良的臨床治療潛力，可為中重度哮喘等過敏性疾病的臨床治療提供潛在的新方案。美迪西為該藥提供了符合GLP規(guī)范的（包括藥代和安全性評價在內的）綜合性臨床前研究服務，在攻堅克難中賦能JYB1904項目成功 獲批。
- CC3122022年6月，惠和生物首個靶向CD19/CD3/CD28三特異性抗體CC312的IND申請獲得FDA默示許可，這是國內首個、全球第三個基于CD28 共刺激信號進入臨床研發(fā)階段的三特異性抗體，CC312在針對血液瘤的臨床前研究中表現(xiàn)出顯著的藥效學作用及良好的安全性。在本次獲批中，美迪西為CC312提供了符合GLP規(guī)范的（包括藥代和安全性評價在內的）綜合性臨床前研究服務，以合規(guī)、高效、高質的服 務助力其順利獲批。
- BAT20222022年6月， 百奧泰注射用BAT2022獲得臨床試驗批準。注射用BAT2022是百奧泰自主研發(fā)的雙特異性中和抗體，擬用于治療由于新冠病毒及其突變株感染引起的新冠肺炎。在注射用BAT2022的臨床前研發(fā)中，美迪西依托豐富的項目經驗和扎實的專業(yè)基礎，在極短時間內向百奧泰呈遞了完整的試驗方案。最終在GLP的實驗室環(huán)境和操作規(guī)范下，完成了注射用BAT2022的安全性評價研究服務，以合規(guī)、高效、高質的服務助力其成功獲批臨床，為注射用BAT2022的快速獲批臨床提供了專業(yè)保障。
- GT900082022年10月，開拓藥業(yè)PD-L1/TGF-β雙靶點抗體(GT90008)獲批臨床。GT90008是一款PD-L1/TGF-β雙靶點抗體，可以同時抑制PD-L1和TGF-βR2的高度活性，具有成為同類最佳藥物的潛力。在GT90008的研發(fā)中，美迪西依托蛋白質/抗體藥代動力學研究平臺和生物技術藥物非人靈長類安全評價技術服務平臺，提供了符合GLP規(guī)范的（包括藥代和安全性評價在內的）和藥代的綜合性臨床前研究服務，整個 項目的研發(fā)進展順利且高效。
- HCW92182022年10月，HCW Biologics Inc.融合蛋白復合物HCW9218獲FDA批準進行癌癥治療試驗。HCW9218是一種異源二聚體、雙功能融合蛋白復合物，包含TGF-β受體II的細胞外結構域和IL-15/IL-15受體α復合物，能有效激活和增殖NK細胞和CD8+ T細胞，增強細胞對腫瘤靶標的細胞毒性，優(yōu)化化療的療效并減少化療副作用。美迪西作為HCW的合作伙伴，在GLP的實驗室環(huán)境和操作規(guī)范下，建立了適用于HCW9218的分析方法，提供了臨床前藥代和安評研究，全力促成該項目的高質高效完成。此外，美迪西臨床前藥理及毒理研究團隊依托在軟件、技術、規(guī)范、素質等各方面全面成熟的SEND數(shù)據(jù)轉換平臺，助力HCW9218成功申報FDA，推動其進入臨床試驗階段。
- NB0022023年7月，邏晟生物NB002順利通過FDA審查并同意開展Ⅰ期臨床試驗。NB002是一款靶向TIM-3獨特表位的單克隆治療抗體，具有顯著的單藥抗腫瘤的治療效果，其不僅顯著激活T和NK細胞的活性，增強其對抗腫瘤的能力，更重要的是NB002重建了腫瘤環(huán)境中被抑制的天然免疫，恢復DC細胞反應能力，提高髓系細胞抗原遞呈功能，整體性解除TIM-3調控的從天然免疫到獲得免疫的抑制性作用，有效地增 強腫瘤免疫殺傷能力。美迪西作為邏晟生物的合作伙伴，為NB002提供了安全性評價、藥代動力學等臨床前研究服務，助力其IND申請順利獲FDA臨床許可。
- 參考文獻：[1] Ivana Spasevska. An outlook on bispecific antibodies: Methods of production and therapeutic benefits.
[2] Abdullah F U H Saeed, et al. Antibody Engineering for Pursuing a Healthier Future. Front Microbiol. 2017 Mar 28;8:495. doi: 10.3389/fmicb.2017.00495.
[3] MA Lin-lin, et al. Construction and screening of phage display library for TIM-3 nanobody. Acta Pharmaceutica Sinica 2018, 53 (3): 388-395.
[4] Hyori Kim, et al. Preclinical development of a humanized neutralizing antibody targeting HGF. Exp Mol Med. 2017 Mar 24;49(3):e309. doi: 10.1038/emm.2017.21.
