腦血管疾病范圍
心腦血管疾病泛指由于高脂血癥、血液黏稠、動脈粥樣硬化、高血壓等所導(dǎo)致的心臟、大腦以及全省組織發(fā)生的缺血性或出血性疾病。我國心腦血管每年治療費用支出5406億元，腦血管疾病每年治療費用占心腦血管疾病25.68%，其中，缺血性腦卒中占比18%，出血性腦卒中占比7%。腦中風(fēng)主要有缺血性中風(fēng)（短暫性腦缺血發(fā)作、動脈粥樣硬化性血栓性腦梗塞、腔隙性腦梗塞、腦栓塞）、出血性中風(fēng)（腦出血、蛛網(wǎng)膜下腔出血）兩大類。疾病名稱
ICD 10代碼
對應(yīng)模型
腦出血
I60-I62
顱內(nèi)自體血注射，蛛網(wǎng)膜下腔出血
腦梗塞
I63
缺血性腦卒中模型
腦卒中
I64
腦血栓
I65
腦栓塞
I66
其他
I67-I69
其他
腦血管系統(tǒng)疾病常用嚙齒類動物模型- 動物模型：局灶性腦缺血：MCAO/R模型-線栓法、栓塞法、光化學(xué)法等全腦缺血：血管夾閉法
- 體外模型：氧糖剝奪模型雙氧水等刺激的氧化應(yīng)激模型其他：Transwell 法考察 BBB 指標(biāo)、離體腦切片、神經(jīng)血管單元等
缺血性腦卒中和出血性腦卒中是腦血管系統(tǒng)最常用的藥效學(xué)評價系統(tǒng)，由于大腦中動脈栓塞模型 MCAO（Middle Cerebral Artery Occlusion）的發(fā)病機理與人類缺血性腦卒中表現(xiàn)相似，對于制作模擬人腦缺血模型對腦缺血發(fā)病機制及藥 物篩選有重要意義，是美國國立衛(wèi)生研究院（National Institutes of Health，NIH）和卒中治療學(xué)術(shù)產(chǎn)業(yè)圓桌會議（Stroke Treatment Academic Industry Roundtable，STAIR）重點推薦藥效學(xué)評價體系。
美迪西MCAO模型系統(tǒng)評價體系
在試驗中通常使用經(jīng)典的線栓法建立模型：分離暴露頸部血管，從頸外動脈(external carotid artery，ECA) 或頸總動脈(common carotid artery，CCA) 分叉處插入尼龍線，進(jìn)入頸內(nèi)動脈 (internal carotid artery，ICA)，阻斷大腦中動脈（Middle Cerebral Artery，MCA）起始端及其所有側(cè)支血液供應(yīng)，導(dǎo)致 MCA 區(qū)局灶缺血。- 美迪西MCAO模型系統(tǒng)評價體系的優(yōu)勢模型評估是檢驗結(jié)果的關(guān)鍵步驟。美迪西嚴(yán)格遵循STAIR腦卒中臨床前藥物開發(fā)策略指導(dǎo)，擁有豐富的MCAO模型建立經(jīng)驗和成 熟的MCAO模型系統(tǒng)評價體系：病灶穩(wěn)定，高成功率，高存活率的大鼠、小鼠MCAO模型；可靠有效的量效時效關(guān)系評價；可完成短暫性腦缺血和永久性腦缺血的藥效評價；可根據(jù)STAIR技術(shù)指南要求，完成多種藥效學(xué)核心指標(biāo)考察；可根據(jù)客戶定制要求，對特殊疾病嚙齒類動物進(jìn)行造模并完成活性評價。
研究目的 模型類型 / 試驗方法 動物種屬 考察指標(biāo) 量效關(guān)系-時效關(guān)系 MCAO 模型 小鼠 ? 腦梗死體積
? 腦含水量
治療時間窗 ? 腦梗死體積
? 腦含水量
? 腦體積
行為學(xué)表征 ? Zea-longa評分
? 平衡木通過時間
? 轉(zhuǎn)棒滯留時間
? 抓握力
綜合評價 大鼠 ? 腦梗死體積
? 行為學(xué)評分
抗凝血功效 毛細(xì)玻管法 小鼠 凝血時間
MCAO小鼠模型評價系統(tǒng)—量效及時效關(guān)系考察- 動物：ICR小鼠，雄性組別： 對照組，模型組，陽性藥組（先必新 ）考察指標(biāo)：TTC法考察梗死體積，烘干法考察腦含水量。方法：? 線栓法對小鼠右側(cè)中動脈進(jìn)行阻斷，阻斷1h后拔除線栓，實現(xiàn)再灌注。? 量效考察：動物分別在梗死后0.5h靜脈注射給藥陽性藥先必新20，10，1，0.1和0.01mg/kg，考察量效關(guān)系。? 時效考察：動物分別在梗死后0.5h以及再灌注后2h，6h，8h和10h靜脈注射給予陽性藥先必新20mg/kg，考察時效關(guān)系。
- TCC 染色法TCC 染色法是對缺血腦組織進(jìn)行染色觀察的常見手段，具體操作為迅速將大鼠大腦取出，用冷鹽水沖洗后，快速放于 -20℃ 冰箱中放置 10 分鐘，待腦組織稍硬后，取出切掉嗅球、垂體、低位腦干，由前向后冠切片，均勻切成 2 mm 厚腦片，等 分切成 5 片，置于 1%TTC 溶液中，37℃ 避光孵育 30 分鐘，每隔 5 分鐘左右翻動一次。TTC 可與正常組織內(nèi)的脫氫酶系統(tǒng)反應(yīng)被還原為玫瑰紅色，因此使組正常組織染呈玫瑰紅色，梗死組織呈白色。
量效關(guān)系考察（TTC和腦含水量）（ mean±SEM）
時效關(guān)系考察（TTC和腦含水量）（ mean±SEM）
MCAO小鼠模型評價系統(tǒng)—治療時間窗考察- 動物：ICR小鼠，雄性組別：對照組，模型組，陽性藥組（先必新 ）考察指標(biāo)：TTC法考察梗死體積，排水法考察腦體積，烘干法考察腦含水量。方法：? 線栓法對小鼠右側(cè)中動脈進(jìn)行阻斷，阻斷1h，2h和4h后拔除線栓，實現(xiàn)再灌注。? 治療時間窗考察：動物分別在梗死后0.5h靜脈注射給藥陽性藥先必新20mg/kg，考察治療時間窗。結(jié)果治療時間窗考察 A：TTC；B：腦體積，C：腦含水量 （mean±SEM）
MCAO小鼠模型評價系統(tǒng)—神經(jīng)功能恢復(fù)考察- 動物：ICR小鼠，雄性組別：對照組，模型組，陽性藥組（先必新 ）考察指標(biāo)：Zea-longa評分，平衡木通過時間，轉(zhuǎn)棒滯留時間，抓握力方法：? 線栓法對小鼠右側(cè)中動脈進(jìn)行阻斷，阻斷1h后拔除線栓，實現(xiàn)再灌注。? 神經(jīng)功能恢復(fù)考察：動物分別在梗死后0.5h靜脈注射給藥? 陽性藥先必新20mg/kg，考察治療時間窗。
- MCAO小鼠模型評價系統(tǒng)—神經(jīng)功能考察神經(jīng)功能藥效學(xué)考察： A: Zea-longa評分；B: 平衡木通過時間
神經(jīng)功能藥效學(xué)考察： C: 轉(zhuǎn)棒滯留時間；D: 抓握力（mean±SEM）
MCAO大鼠模型評價系統(tǒng)-大鼠行為學(xué)考察- 動物：SD大鼠，雄性組別：對照組，模型組，陽性藥1組（依達(dá)拉奉 ），陽性藥2組（尼莫地平）考察指標(biāo)：Zea-longa評分， TTC法考察梗死體積方法：? 線栓法對大鼠右側(cè)中動脈進(jìn)行阻斷，阻斷2h后拔除線栓，實現(xiàn)再灌注。? 藥效學(xué)考察：動物分別在梗死后0.5h靜脈注射給藥陽性藥，考察兩陽性藥藥效學(xué)作用。
- 大鼠行為學(xué)考察 （Zea-longa評分和動物行為）無神經(jīng)功能缺陷：0 分；癱瘓側(cè)前爪不能完全伸展：1 分；行走時向癱瘓側(cè)轉(zhuǎn)圈：2 分；行走時向癱瘓側(cè)傾倒：3 分；不能自動行走，存在意識喪失現(xiàn)象：4 分。
- 結(jié)果-1：大鼠的行為學(xué)評分
- Result-2：TTC staining of brain腦梗死體積考察（ TTC染色和梗死體積比）
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