抗體的制備服務(wù)

根據(jù)制備的原理和方法，抗體制備服務(wù)可分為三類：多克隆抗體、單克隆抗體、基因工程抗體。

多克隆抗體制備 ：美迪西多克隆抗體制備服務(wù)擁有專業(yè)的抗體制備人員、先進的抗體制備生產(chǎn)儀器、引進先進的制備技術(shù)，美迪西根據(jù)客戶需求專業(yè)打造制備方案，主要提供的動物選擇包括兔、小鼠、大鼠等。

單克隆抗體制備 ：美迪西單克隆抗體制備服務(wù)內(nèi)容 （1）免疫和ELISA檢測：客戶提供蛋白質(zhì)或多肽與載體蛋白（如KLH）偶聯(lián)，需要約4mg蛋白質(zhì)免疫源或5~10mg多肽，免疫5只Balb/c小鼠，采血用ELISA進行檢測。  （2）融合和帥選：用小鼠脾細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞進行融合，得到的雜交瘤細(xì)胞通過增殖和ELISA篩選得到高效價的克隆。（3）亞克隆和交付結(jié)果：挑選兩個最好的克隆進行亞克隆和亞型鑒定，交付結(jié)果包括每個克隆一瓶細(xì)胞核5ml培養(yǎng)上清。

基因工程抗體制備 ：研究成功的基因工程抗體有：嵌合抗體、重構(gòu)抗體、小分子抗體等。

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一、多克隆抗體制備服務(wù)

大多數(shù)天然抗原物質(zhì)(如細(xì)菌或其分泌的外毒素以及各種組織成分等)往往具有多種不同的抗原決定簇，而每一決定簇都可刺激機體產(chǎn)生一種特異性抗體。
多克隆抗體是多個抗原決定簇刺激機體后，由多個免疫淋巴細(xì)胞分泌的多種抗體的混合物。

    多克隆抗體的制備方法

    由于這種抗體是不均一的，無論是對抗體分子結(jié)構(gòu)與功能的研究或是臨床應(yīng)用都受到很大限制，因此稱為第一代抗體；

二、單克隆抗體制備
在機體淋巴組織內(nèi)可存在千百種抗體形成細(xì)胞(即B細(xì)胞)，每種抗體形成細(xì)胞只識別其相應(yīng)的抗原決定簇，當(dāng)受抗原刺激后可增殖分化為一種細(xì)胞群，這種由單一細(xì)胞增殖形成的細(xì)胞群體可稱為細(xì)胞克隆(clone)。
同一克隆的B細(xì)胞可合成和分泌在理化性質(zhì)、分子結(jié)構(gòu)、遺傳標(biāo)記以及生物學(xué)特性等方面都是完全相同的均一性抗體，亦可稱之為單克隆抗體。單克隆抗體為只針對某一特定的抗原決定簇，純度高的抗體，因此稱為第二代抗體。

1、優(yōu)點
（1）制備時不需純化抗原就可得到純抗體；　　?。?）有很高的效價
（3）有高度的單一性、均一性； 　　　　　　　  （4）產(chǎn)量高，且可連續(xù)生產(chǎn)

2、單克隆抗體制備基本原理
體內(nèi)免疫法很難獲得單克隆抗體，如能將所需要的抗體形成細(xì)胞選出，并能在體外進行培養(yǎng)，就可以獲得已知特異的單克隆抗體。

雜交瘤細(xì)胞：既具有骨髓瘤細(xì)胞能大量無限生長繁殖的特性，又具有抗體形成細(xì)胞合成和分泌抗體的能力。這種抗體是由識別一種抗原決定簇的細(xì)胞克隆所產(chǎn)生的均一性抗體，故稱之為單克隆抗體。
應(yīng)用雜交瘤技術(shù)可獲得幾乎所有抗原的單克隆抗體，只要這種抗原能引起小鼠的抗體應(yīng)答。
（1）DNA合成
?、?主要途徑：參考生物化學(xué)，可被氨基喋呤(A)所阻斷
?、?旁路途徑：利用次黃嘌呤(H)和胸腺嘧啶核苷(T)合成DNA；
　　　　　　　 所需要的酶為次黃嘌呤-鳥嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶(HGPRT)、胸腺嘧啶核苷激酶(TK)。
（2）骨髓瘤細(xì)胞：來源于BABC/ c小鼠的骨髓瘤細(xì)胞系；沒有合成抗體的能力；體外具有無限生長繁殖的能力；喪失合成HGPRT和TK的能力；只能通過主要途徑合成DNA；在含有次黃嘌呤(H)、氨基喋呤(A) 、胸腺嘧啶核苷(T)的HAT培養(yǎng)基中不能生長。
（3）免疫淋巴細(xì)胞：通常來源于BALB/c小鼠的脾淋巴細(xì)胞；具有合成抗體的能力；具有合成HGPRT和TK的能力；能通過主要途徑和旁路途徑合成DNA；HAT培養(yǎng)基中能生長，但短壽，只能存活幾天，體外不具有無限生長繁殖的能力
（4）融合劑：Kohler和Milstein最早仙臺病毒；后來發(fā)現(xiàn)聚乙二醇（PEG）的融合效果更好，且避免了病毒的污染問題。
（5）雜交瘤細(xì)胞：具有合成抗體的能力(從免疫淋巴細(xì)胞獲得)；具有合成HGPRT和TK的能力(從免疫淋巴細(xì)胞獲得)；能通過主要途徑和旁路途徑合成DNA；HAT培養(yǎng)基中能生長；體外具有無限生長繁殖的能力(從骨髓瘤細(xì)胞獲得)。
（6）飼養(yǎng)細(xì)胞：單個或少數(shù)細(xì)胞在體外培養(yǎng)很難成活，必需加入其他細(xì)胞以增加細(xì)胞密度，維持其代謝，使之成活繁殖；被加入的這種細(xì)胞稱為“飼養(yǎng)細(xì)胞”。最常用的小鼠腹腔巨噬細(xì)胞。

3、單克隆抗體制備過程：
制備抗原 → 免疫動物 → 免疫脾細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞的制備 → 細(xì)胞融合 → 雜交瘤細(xì)胞的選擇培養(yǎng) → 雜交瘤細(xì)胞的的篩選
→ 雜交瘤細(xì)胞的克隆化 → 單克隆抗體的檢定 → 雜交瘤細(xì)胞系的建立 → 單克隆抗體的大量制備（動物體內(nèi)誘生法和體外培養(yǎng)法）

制備抗原免疫脾細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞的制備細(xì)胞融合雜交瘤細(xì)胞的選擇培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞的的篩選雜交瘤細(xì)胞的克隆化單克隆抗體的檢定雜交瘤細(xì)胞系的建立單克隆抗體的大量制備

4、單克隆抗體的應(yīng)用
（1）診斷試劑：用于各種病原體以及腫瘤的診斷。
（2）治療試劑：獸醫(yī)臨床上傳染病的治療；醫(yī)學(xué)臨床上抑制器官移植排斥、治療自身免疫疾病、制備生物導(dǎo)彈。
（3）檢測試劑：各種病原體毒力因子的檢測；各種免疫細(xì)胞及其它組織細(xì)胞表面分子的檢測。

三、基因工程抗體(genetically engineering antibody)
自1975年單克隆抗體雜交瘤技術(shù)問世以來，單克隆抗體在醫(yī)學(xué)中被廣泛地應(yīng)用于疾病的診斷及治療。但目前絕大數(shù)單克隆抗體是鼠源的，臨床重復(fù)給藥時體內(nèi)產(chǎn)生抗鼠抗體，使臨床療效減弱或消失。因此，醫(yī)學(xué)臨床上最理想的單克隆抗體應(yīng)是人源的,但人-人雜交瘤技術(shù)目前尚未突破。
目前較好的解決辦法是能研制基因工程抗體，以代替鼠源單克隆抗體用于臨床。基因工程抗體興起于80年代早期，是利用DNA重組技術(shù)，在分子水平對抗體基因進行切割、拼接或修飾，或人工合成后導(dǎo)入受體細(xì)胞表達，從而產(chǎn)生的新型抗體，也稱為第三代抗體。

研究成功的基因工程抗體有：嵌合抗體、重構(gòu)抗體、小分子抗體等。

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