美迪西酶聯(lián)免疫吸附試驗技術(shù)服務

2016-03-30

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酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）技術(shù)服務：各類酶聯(lián)免疫吸附試驗的檢測、酶聯(lián)斑點圖像的分析、克隆形成自動分析、溶血斑點實驗、病毒斑等。

酶聯(lián)免疫吸附試驗

免疫酶技術(shù)(immunoenzymatic technique) 最早應用的免疫酶技術(shù)是免疫酶組織化學染色，即用標記的抗體與標本中的抗原發(fā)生特異性結(jié)合，當加入酶的底物時，在酶的作用下經(jīng)一系列生化反應產(chǎn)生有色物質(zhì)，借助光鏡作出定位判斷。目前，應用最廣泛的是酶聯(lián)免疫吸附試驗(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)。該法特異性強，敏感性高，既可檢測抗體，又能測定可溶性抗原。ELISA常采用的酶為辣根過氧化物酶(hosradish peroxidase，HRP)，其底物是二氨基苯胺(DAB)，底物被分解則呈棕褐色，可目測或借助酶標儀比色。

酶聯(lián)免疫吸附測定enzyme linked immunosorbent assay（簡寫ELISA）指將可溶性的抗原或抗體結(jié)合到聚苯乙烯等固相載體上，利用抗原抗體結(jié)合專一性進行免疫反應的定性和定量檢測方法。

ELISA是將抗原與抗體免疫反應的特異性，同酶的高效催化作用相結(jié)合，而建立的一種非放射性標記免疫檢測技術(shù)。可以定性或定量檢測體液中的半抗原、抗原和抗體。該技術(shù)用化學方法使酶與抗原或抗體結(jié)合生成酶標記物，或通過免疫方法將酶與抗酶抗體相結(jié)合生成酶抗體結(jié)合物。

酶聯(lián)免疫吸附試驗(Elisa)的基本原理有三條：
（1）抗原或抗體能以物理性地吸附于固相載體表面，可能是蛋白和聚苯乙烯表面間的疏水性部分相互吸附，并保持其免疫學活性；
（2）抗原或抗體可通過共價鍵與酶連接形成酶結(jié)合物，而此種酶結(jié)合物仍能保持其免疫學和酶學活性；
（3）酶結(jié)合物與相應抗原或抗體結(jié)合后，可根據(jù)加入第五的顏色反應來判定是否有免疫反應的存在，而且顏色反應的深淺是與標本中相應抗原或抗體的量成正比例的，因此，可以按底物顯色的程度顯示試驗結(jié)果。
酶聯(lián)免疫分析用抗原與抗體的特異反應將待測物與酶連接，然后通過酶與底物產(chǎn)生顏色反應，用于定量測定。測定的對象可以是抗體也可以是抗原。

酶聯(lián)免疫分析測定方法：主要研究方法有間接法（常用于檢測抗體）/雙抗體夾心法（常用于檢測抗原）/抗原競爭法（既可檢測抗原，亦可檢測抗體）。
1、測定抗體的間接法
a．將抗原吸附于固相載體表面，洗滌除去未吸附的抗原。
b．加抗體，保溫，形成抗原—抗體復合物洗滌除去其余的雜蛋白。
c．加酵標抗抗體，保溫，洗滌。
d．加入底物，測定底物的降解量二抗體量。
2、測定抗原的雙抗體夾心法
首先將特異抗體的免疫球蛋白吸附在反應板凹孔內(nèi)，洗滌除去未吸附的抗體，加入含有抗原的待測溶液，保溫形成抗原—抗體復合物，洗滌除去雜蛋白后再加上述特異抗體，由于抗原是多價的并未被抗體飽和，經(jīng)保溫則可形成抗體—抗原—抗體復合物，洗滌后加酶標抗抗體，保溫洗滌后加底物呈色，中止酶活性，比色測定抗原量。
3、測定抗原的競爭法

將含有特異抗體的免疫球蛋白吸附在兩份相同的載體（甲）和（乙）中，然后在（甲）中加入酶標抗原和待測抗原，（乙）中只加酶標抗原，其濃度相同于（甲）中加入的酶標抗原的濃度，保溫洗滌后加底物呈色。待測液中未知抗原量愈多，則酶標抗原被結(jié)合的量就愈少，有色產(chǎn)物就愈少，以此便可測出未知抗原的量，即等于（甲）與（乙）底物降解量的差值。