2017年8月31日，美國FDA批準(zhǔn)了第一個(gè)基因治療方法CAR-T細(xì)胞療法的藥物。該藥物靶向抗原CD19，是一種表達(dá)于多種血液腫瘤細(xì)胞表面的抗原蛋白，包括B細(xì)胞淋巴瘤和白血病細(xì)胞，用于治療25歲以下復(fù)發(fā)性或難治性B-細(xì)胞急性淋巴細(xì)胞白血病患者。
CAR-T療法是利用病人自身的免疫細(xì)胞來清除癌細(xì)胞。嚴(yán)格來說，這是一種細(xì)胞療法，而不是一種藥，嵌合抗原受體T細(xì)胞免疫療法作為細(xì)胞療法的代表，能從患者體內(nèi)分離出T細(xì)胞，并引入靶向腫瘤抗原的嵌合抗原受體（CAR）。這些受體能引導(dǎo)T細(xì)胞進(jìn)攻癌細(xì)胞，從而對后者造成殺傷。
CAR-T細(xì)胞治療產(chǎn)品與其它非體內(nèi)擴(kuò)增藥物完全不同，這種不同不僅體現(xiàn)在個(gè)體化、產(chǎn)量小及批次有限等方面 ，而且存在起始材料差異大、制備工藝不成熟、生物學(xué)效力以及安全性評價(jià)復(fù)雜等問題。
2020年04月16日，美迪西藥理部高級主任
韋毅博士見招拆招，詳細(xì)解答了CAR-T細(xì)胞療法非臨床研究中四大階段：體外藥效學(xué)研究、體內(nèi)藥效學(xué)研究、藥代動(dòng)力學(xué)研究和安全性研究的各種問題。美迪西臨床前研究服務(wù)建立了與國際對標(biāo)的研究操作流程和質(zhì)量體系，擁有國際AAALAC認(rèn)證和中國NMPA認(rèn)證，GLP實(shí)驗(yàn)室同時(shí)達(dá)到美國FDA、澳洲TGA等國際標(biāo)準(zhǔn)。同時(shí)，美迪西把握免疫治療和靶向治療腫瘤新趨勢，不斷開拓和完善新興腫瘤治療的臨床前研究平臺。
一、CAR-T 體外藥效學(xué)研究
1、有哪些體外試驗(yàn)可以檢測CAR-T的效力？
將CAR-T細(xì)胞與腫瘤靶細(xì)胞體外共同孵育后檢測腫瘤殺傷率或增殖抑制率；
IFN-γ的表達(dá)量；
CAR-T細(xì)胞上某種與殺傷相關(guān)的細(xì)胞表型的變化等。
2、如何評判所選的體外效力檢測方法是否有效？
在早期的方法學(xué)驗(yàn)證時(shí)，要分析方法的專屬性，證明其生物學(xué)效力與CAR-T細(xì)胞具有一定的量效關(guān)系，并考慮采用體內(nèi)法驗(yàn)證體外法的有效性。
二、CAR-T 體內(nèi)藥效學(xué)研究
1、非臨床研究的體內(nèi)試驗(yàn)的受試物來源有哪些？
動(dòng)物來源，進(jìn)行Proof-of-Concept；
健康志愿者捐贈(zèng)的血液，臨床擬用產(chǎn)品；
患者的血液，一般不必要使用。
2、目前常用的CAR-T藥物非臨床研究動(dòng)物模型有哪些？
同源小鼠模型
完整的免疫系統(tǒng)，鼠源CAR-T細(xì)胞可以靶向性與體內(nèi)腫瘤相關(guān)抗原（TAA）結(jié)合。僅限于鼠源細(xì)胞制備的CAR-T產(chǎn)品。
轉(zhuǎn)基因小鼠模型
免疫系統(tǒng)正常鼠，表達(dá)人的TAA，研究對象需要為鼠源細(xì)胞。
移植瘤小鼠模型
免疫缺陷小鼠中移植人源腫瘤，可用來研究人源CAR-T細(xì)胞對人源腫瘤的作用。
免疫系統(tǒng)重建人源化小鼠
通過向免疫缺陷鼠移植人免疫細(xì)胞制備得來。
*目前常用移植瘤小鼠模型研究CAR-T細(xì)胞對腫瘤的抑制作用。
3、體內(nèi)檢測常用的檢測方法和評價(jià)指標(biāo)有哪些？
| 檢測方法 | 評價(jià)指標(biāo) |
| 生物發(fā)光成像技術(shù)BLI | 熒光強(qiáng)度表示腫瘤荷載量 |
| 流式細(xì)胞術(shù) | 體內(nèi)腫瘤細(xì)胞數(shù)量 |
| 免疫學(xué)方法ELISA、MSD等 | 血清中與腫瘤相關(guān)的細(xì)胞因子變化 |
| 常規(guī)藥理學(xué)、病理學(xué) | 腫瘤相關(guān)參數(shù) |
4、體內(nèi)藥效檢測的試驗(yàn)設(shè)計(jì)要注意哪些問題？
包含不同的劑量水平以體現(xiàn)量效關(guān)系；
需設(shè)置T細(xì)胞對照組（未轉(zhuǎn)染的T細(xì)胞）；
建議使用來自不同捐贈(zèng)者生產(chǎn)的CAR-T細(xì)胞研究，評估藥效穩(wěn)定性；
增加或者設(shè)置衛(wèi)星組。
三、CAR-T藥代動(dòng)力學(xué)研究
1、CAR-T療法PK研究的重要性
CAR-T細(xì)胞產(chǎn)品具有較強(qiáng)的靶向細(xì)胞殺傷活性，與人體內(nèi)的非腫瘤細(xì)胞結(jié)合，可引起嚴(yán)重的脫靶副作用。
CAR-T細(xì)胞的體內(nèi)效力又依賴于細(xì)胞的有效增殖及免疫記憶的形成。
2、藥代研究動(dòng)物模型如何選擇？
CAR-T細(xì)胞產(chǎn)品具有較強(qiáng)的靶向細(xì)胞殺傷活性，與人體內(nèi)的非腫瘤細(xì)胞結(jié)合，可引起嚴(yán)重的脫靶副作用。
3、CAR-T藥代的檢測技術(shù)有哪些？
成像技術(shù)；
流式細(xì)胞術(shù)；
免疫組化技術(shù)；
定量PCR技術(shù)等。
四、CAR-T非臨床安全性研究
1、CAR-T細(xì)胞產(chǎn)品的安全性風(fēng)險(xiǎn)主要包括：
細(xì)胞因子釋放綜合征（CRS）；
可逆的神經(jīng)毒性；
B細(xì)胞減少；
靶向與脫靶（on-target/off-tumor）；
CAR-T細(xì)胞的成瘤性/致瘤性。
2、CAR-T細(xì)胞的非臨床安全性研究是否需要在GLP條件下進(jìn)行？
CAR-T細(xì)胞治療產(chǎn)品的非臨床安全性評價(jià)研究也應(yīng)遵從《藥物非臨床研究質(zhì)量管理規(guī)范》（GLP）。
美迪西獲得了AAALAC 認(rèn)證和國家藥品監(jiān)督管理局（NMPA）GLP 證書，GLP實(shí)驗(yàn)室同時(shí)達(dá)到美國FDA的GLP標(biāo)準(zhǔn)，研究數(shù)據(jù)受澳大利亞藥品監(jiān)督管理局的認(rèn)可。同時(shí)我們建立了與國際接軌的研究操作流程和質(zhì)量體系，符合國內(nèi)外研發(fā)標(biāo)準(zhǔn)及監(jiān)管要求。
3、CAR-T細(xì)胞的非臨床安全性研究中受試物如何準(zhǔn)備？
鑒于CAR-T產(chǎn)品制備過程的特殊性，委托方應(yīng)提供受試物完整的質(zhì)量分析數(shù)據(jù)報(bào)告，并應(yīng)提供覆蓋所有給藥濃度以及模擬所有運(yùn)輸過程、處理操作、直至動(dòng)物給藥前過程的受試物穩(wěn)定性研究數(shù)據(jù)。
受試物在到達(dá)研究機(jī)構(gòu)后，如果在給藥前需要經(jīng)過復(fù)蘇、重懸等處理操作，研究機(jī)構(gòu)至少要對細(xì)胞形態(tài)、活細(xì)胞總數(shù)、細(xì)胞活率、顏色、除細(xì)胞之外的其它外源性異物等進(jìn)行觀察或檢測。
如果受試物到達(dá)研究機(jī)構(gòu)后可以不經(jīng)處理直接給藥（在穩(wěn)定性允許的時(shí)間范圍內(nèi)），則上述檢測可以由委托方進(jìn)行。
4、如何利用已有人體試驗(yàn)數(shù)據(jù)？
如果已有的人體數(shù)據(jù)在經(jīng)過科學(xué)地評估后，可以提示細(xì)胞治療產(chǎn)品的有效性與安全性，可以保證臨床受試者安全性，則非臨床研究可以本著具體品種具體分析的原則免除不必要的動(dòng)物試驗(yàn)。
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