- 轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)以藥物研發(fā)過程中生物標(biāo)志物為核心，以精準(zhǔn)醫(yī)療提高藥物研發(fā)臨床應(yīng)答率為目標(biāo)，覆蓋從早期靶點確認(rèn)——臨床前R&D ——臨床I、II、III期Development，到上市后的藥物檢測，通過不同階段的研究實現(xiàn)藥物研發(fā)的閉環(huán)。
- 01
- 02
- 03
- 04臨床研究
- 05上市
隨著基因組學(xué)、蛋白質(zhì)組學(xué)和代謝組學(xué)等多組學(xué)分析技術(shù)不斷地發(fā)展，治療方式已經(jīng)從傳統(tǒng)小分子擴展到多肽、蛋白、抗體、基因療法、細(xì)胞療法等多種新型技術(shù)。盡管有這些新技術(shù)，但仍有大量疾病的致病原因還無法徹底明白。轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)將生物醫(yī)學(xué)觀察和研究轉(zhuǎn)化為改善健康的干預(yù)措施的過程，加速了基礎(chǔ)研究、新藥開發(fā)的和臨床轉(zhuǎn)化的進程，成為精準(zhǔn)靶向治療的加速器。轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)研究利用各種研究手段，確定靶點與疾病發(fā)生發(fā)展的關(guān)系、驗證和探索藥物的作用機制、發(fā)現(xiàn)生物標(biāo)志物并開發(fā)伴隨診斷產(chǎn)品，以及為臨床研究開展篩選最合適的人群和適應(yīng)癥等，從而提高新藥研發(fā)效率和成功率。
將轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)里程碑疊加到藥物開發(fā)階段[1]美迪西請回答：什么是轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)
服務(wù)平臺
免疫組化技術(shù)平臺- 免疫組化簡介免疫組化，也稱免疫組織化學(xué)技術(shù)(immunohistochemistry)或免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)(immunocytochemistry)。是指應(yīng)用免疫學(xué)基本原理即抗原與抗體特異性結(jié)合的原理，通過化學(xué)反應(yīng)使標(biāo)記抗體的顯色劑顯色來確定組織細(xì)胞內(nèi)抗原（多肽和蛋白質(zhì)），對其進行定位、定性及相對定量的研究。根據(jù)抗原抗體反應(yīng)和化學(xué)顯色的原理，組織切片或細(xì)胞樣本中的抗原先和一抗結(jié)合，再利用一抗與二抗反應(yīng)，DAB進行顯色，進而進行分析。主要步驟組織處理、固定、切片抗原修復(fù)除去內(nèi)源性過氧化物酶封閉一抗、二抗孵育檢測復(fù)染
- 組織處理、固定、切片組織固定可保存抗原，防止采集的組織自溶和壞死。組織包埋可在切片過程中對組織提供支撐，使切片更堅實。
石蠟切片 冰凍切片 固定 包埋前：甲醛 切片前或切片后：甲醛、甲醇、乙醇或丙酮 切片 切片機 冰凍切片機 儲存 室溫下儲存多年 -80 °C下儲存1年 （-190°C下儲存時間更長） 優(yōu)勢 容易操作，不會損壞切片 ? 保留酶的功能和抗原性
? 實驗流程簡短（通常不需要冗長的固定步驟）
局限性 ? 過度固定會掩蓋抗原表位，進而增加抗原修復(fù)的需求
? 處理時間長：在梯度酒精和二甲苯中逐步脫水，以便于石蠟滲透。
? 如果沒有快速冷凍組織”可能會形成冰晶，從而破壞組織結(jié)構(gòu)
? 冰凍切片通常比石蠟切片厚，可能會導(dǎo)致分辨率低、圖像差
? 可能需要阻斷內(nèi)源活性酶。
石蠟切片 vs冰凍切片 - 處理流程
- 抗原修復(fù)對甲醛固定的組織切片進行抗原修復(fù)，以暴露抗原位點，從而使抗體結(jié)合。
熱誘導(dǎo)的抗原表位修復(fù) 蛋白水解酶誘導(dǎo)的抗原表位修復(fù) 優(yōu)勢 抗原表位的修復(fù)更溫和，參數(shù)更可控。 適用于較難修復(fù)的抗原表位。 ph值 通常使用pH6的緩沖液，但堿性緩沖液也在廣泛使用。必須通過實驗確定 pH值通常為7.4。 溫度 約95°C。 通常為37°C 孵育時間 10-20分鐘 10-15分鐘 緩沖液組分 取決于靶抗原所需的pH 值。常用的緩沖液包括檸檬酸鈉、EDTA和Tris-EDTA 酶(如胃蛋白酶、蛋白酶K 或胰蛋白酶)的中性緩沖液。 注意事項 微波爐加熱可能會導(dǎo)致抗原修復(fù)不均勻。劇烈沸騰會導(dǎo)致脫片(組織與載玻片分離）。 酶修復(fù)有時會破壞切片的形態(tài)- 濃度和時間需要優(yōu)化 抗原修復(fù)的主要方法 - 封閉用血清或BSA封閉，防止抗體的非特異性結(jié)合，并降低背景和潛在的假陽性結(jié)果。? 蛋白封閉：使用血清或BSA 進行封閉對于防止抗體與組織或Fc 受體（與抗體恒定區(qū)（Fc）結(jié)合的受體）發(fā)生非特異性結(jié)合至關(guān)重要。二抗種屬來源的血清是很好的封閉試劑。使用牛血清白蛋白（BSA）或酪蛋白，可用于阻斷非特異性抗體結(jié)合。? 生物素封閉：在使用基于親和素/生物素的檢測系統(tǒng)時，阻斷內(nèi)源性生物素，因為內(nèi)源性生物素存在于許多組織中，特別是腎臟、脾臟、肝臟和大腦中。用親和素與組織孵育，阻斷內(nèi)源生物素，然后用外源生物素孵育，以阻斷親和素分子上額外的生物素結(jié)合位點。
- 檢測? 酶顯色法：顯色檢測使用酶能夠催化可溶性底物產(chǎn)生有色沉淀。這些酶通常偶聯(lián)在二抗上，也可以偶聯(lián)在一抗上用于直接檢測。最常用的酶有HRP 和AP，前者將DAB 轉(zhuǎn)化成棕色產(chǎn)物，后者將3-氨基-9-乙基咔唑 (AEC) 轉(zhuǎn)化成紅色產(chǎn)物。顯色檢測通常比熒光檢測更靈敏。此外，不同于熒光染料，有色沉淀物有光穩(wěn)定性，因此染色切片能夠保存多年。熒光檢測需要使用專業(yè)熒光顯微鏡和濾光片，顯色檢測僅需使用標(biāo)準(zhǔn)顯微鏡。然而，顯色檢測的孵育和封閉步驟比熒光法更多，時間也更長。? 熒光法：熒光檢測（免疫熒光）是基于熒光基團被特定波長的光激發(fā)后發(fā)射波長較長的熒光的特性。熒光檢測常常用于需要同時檢測多種抗原的情況。熒光染料可以與一抗或二抗直接偶聯(lián)，也可與鏈霉素親和素偶聯(lián)。
- 案例賞析：PD-L1, Ki-67, Her2, CD31, CD163, FoxP3
IHC Analysis of the expression ofa)PD-L1 from lung adenocarcinoma[3]; b)Ki-67 from periampullary tumors[4]; c)Her2 from lung tumor[5]; d)CD31 from human gastric adenocarcinoma[6]; e)CD163 (M2 TAM marker) from oral squamous cell carcinoma (OSCC)[7]; f)FoxP3 from human glioblastoma[8].
總結(jié)與展望- 基于基因組學(xué)、蛋白組學(xué)、細(xì)胞組學(xué)及病理組學(xué)等綜合性轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)平臺；高質(zhì)量的研發(fā)管理團隊；美迪西轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)平臺致力于為全球合作伙伴提供全方位生物標(biāo)志物發(fā)現(xiàn)、靶點驗證、伴隨診斷開發(fā)與商業(yè)化檢測等一體化解決方案。? 以ELISA、ECL（MSD), SIMOA（HD-X), Biacore 8K 技術(shù)構(gòu)建的的蛋白質(zhì)相互作用，蛋白水平生物標(biāo)志物平臺；? 以流式細(xì)胞術(shù)（BD Symphony A3，BD Fortesssa, Beckman CytoFLEX S）為主構(gòu)建的細(xì)胞水平生物標(biāo)志物平臺；? 以熒光定量PCR技術(shù)構(gòu)建的多重核酸水平生物標(biāo)志物平臺；? 免疫組化（TAMs-IHC，F(xiàn)ISH）技術(shù)構(gòu)建的病理水平生物標(biāo)志物平臺等。
- 參考文獻：[1] Hugues Dolgos, et al. Translational Medicine Guide transforms drug development processes: the recent Merck experience. Drug Discov Today. 2016 Mar;21(3):517-26. doi: 10.1016/j.drudis.2016.01.003.[2] Ying Xu, et al. A Selective Small-Molecule c-Myc Degrader Potently Regresses Lethal c-Myc Overexpressing Tumors. Adv Sci (Weinh). 2022 Mar;9(8):e2104344. doi: 10.1002/advs.202104344.[3] Jonas J Heymann, et al. PD-L1 expression in non-small cell lung carcinoma: Comparison among cytology, small biopsy, and surgical resection specimens. Cancer Cytopathol. 2017 Dec;125(12):896-907. doi: 10.1002/cncy.21937.[4] Mark M Aloysius, et al. Predictive value of tumor proliferative indices in periampullary cancers: Ki-67, mitotic activity index (MI) and volume corrected mitotic index (M/V) using tissue microarrays. World J Surg. 2010 Sep;34(9):2115-21. doi: 10.1007/s00268-010-0681-3.[5] Montse Verdu, et al. Cross-reactivity of EGFR mutation-specific immunohistochemistry assay in HER2-positive tumors. Appl Immunohistochem Mol Morphol. 2015 Sep;23(8):565-70.[6] Qingling Wang, et al. EPCR promotes MGC803 human gastric cancer cell tumor angiogenesis in vitro through activating ERK1/2 and AKT in a PAR1-dependent manner. Oncol Lett. 2018 Aug;16(2):1565-1570. doi: 10.3892/ol.2018.8869.[7] Faustino J Suárez-Sánchez, et al. Macrophages in Oral Carcinomas: Relationship with Cancer Stem Cell Markers and PD-L1 Expression. Cancers (Basel) (IF: 6.13; Q1). 2020 Jul 2;12(7):1764. doi: 10.3390/cancers12071764.[8] Qi Yue, et al. The prognostic value of Foxp3+ tumor-infiltrating lymphocytes in patients with glioblastoma. J Neurooncol. 2014 Jan;116(2):251-9. doi: 10.1007/s11060-013-1314-0. Epub 2013 Nov 26.[9] Christopher P Austin.Opportunities and challenges in translational science. Clin Transl Sci. 2021 Sep;14(5):1629-1647. doi: 10.1111/cts.13055.
