小核酸藥物行業(yè)發(fā)展迅速，至今已有15款藥物獲批，成為繼小分子和抗體藥物后的第三波創(chuàng)新藥浪潮。然而受限于遞送手段以及內(nèi)含體陷阱，目前已上市的小核酸藥物僅能針對(duì)肝臟靶點(diǎn)。小核酸抗體偶聯(lián)藥物(AOC)結(jié)合了小核酸藥物的精準(zhǔn)性和抗體等大分子藥物的特異性?xún)纱髢?yōu)點(diǎn)。

AOC的意義：利用抗體藥物的特異性作用，解決小核酸藥物的靶向問(wèn)題，使小核酸藥物能進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，靶向mRNA；利用抗體藥物的穩(wěn)定性結(jié)構(gòu)，提高小核酸的穩(wěn)定性；最終促進(jìn)小核酸藥物安全、有效、選擇性地治療疾病等。

核酸藥物是生物醫(yī)藥發(fā)展的前沿領(lǐng)域，核酸藥物靶向給藥系統(tǒng)是難點(diǎn)也是重點(diǎn)。目前小核酸藥物在靶向肝臟細(xì)胞/組織中已經(jīng)取得了重大進(jìn)展，但無(wú)法解決肝臟以外的藥物靶向遞送。且也存在劑量、濃度以及時(shí)間依賴(lài)性等問(wèn)題。同時(shí)，近年來(lái)抗體藥呈現(xiàn)出爆發(fā)式發(fā)展，在疾病市場(chǎng)中所占比重越來(lái)越高。一方面，抗體對(duì)腫瘤細(xì)胞抗原所具備的高特異性親和力是藥物靶向遞送的理想載體，利用其可以將藥物靶向遞送至腫瘤病灶部位。另一方面，現(xiàn)有抗體藥物單獨(dú)使用抗腫瘤療效有限，且多數(shù)初始接受抗體治療有效的患者易產(chǎn)生耐藥性。

因此，目前抗體藥與其他藥物偶聯(lián)形成新型藥物的組合聯(lián)用策略越來(lái)越多。以小核酸抗體偶聯(lián)藥物(AOC) 等新遞送方法吸引了人們的廣泛關(guān)注,成為肝靶向外組織特異性遞送的有效開(kāi)發(fā)手段?

小核酸藥物遞送技術(shù)發(fā)展歷程

第一代：LNP+小核酸 →肝臟：

將小核酸藥物包裹在脂質(zhì)納米顆粒（LNP）中，使被包裹的小核酸藥物免于降解和清除，并促進(jìn)其跨細(xì)胞膜運(yùn)輸?shù)侥繕?biāo)靶位。LNP攜帶小核酸藥物通過(guò)載脂蛋白E(ApoE)介導(dǎo)的內(nèi)吞作用富集在肝細(xì)胞中,適用于治療肝臟相關(guān)的疾病。

第二代：GalNAc+小核酸 →肝臟：

N-乙酰半乳糖胺 (GalNAc) 通過(guò)酸敏感的化學(xué)linker與小核酸藥物相連。酸敏感的linker設(shè)計(jì)可使核酸偶聯(lián)物在通過(guò)內(nèi)吞作用進(jìn)入細(xì)胞之后與偶聯(lián)物脫離。GalNAc可與肝細(xì)胞表面的糖蛋白受體ASGPR特異性結(jié)合，形成的復(fù)合物通過(guò)胞吞作用進(jìn)入肝細(xì)胞，此外，ASGPR能以較高的循環(huán)速率重復(fù)使用，并結(jié)合胞外其它GalNAc，最終減少給藥劑量。ASGPR僅在肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞高表達(dá)，利用GalNAc遞送可精確靶向肝臟，治療肝部疾病。

第三代：抗體+ linker+小核酸（即AOC)：

小核酸抗體偶聯(lián)藥物(AOC)的結(jié)構(gòu)與ADC相似，主要由三部分構(gòu)成：發(fā)揮組織靶向作用的載體，連接子（linker），作為payload的小核酸。AOC將抗體和小核酸有效地結(jié)合在一起，以實(shí)現(xiàn)靶向治療，可以減少治療疾病所需的藥物量，同時(shí)解決不可靶向和小核酸藥物的遞送問(wèn)題。與傳統(tǒng)的小核酸療法相比，AOC具有更好的藥代動(dòng)力學(xué)特性和更具特異性的生物分布。

AOC藥物偶聯(lián)技術(shù)原理

小核酸藥物通常比小分子藥物具有更多的偶聯(lián)方法。以下為制備小核酸抗體偶聯(lián)藥物(AOC)的四種常用方法：

離子相互作用 （電荷相互作用）

寡核苷酸主鏈帶負(fù)電荷，魚(yú)精蛋白帶正電荷。將抗體或抗體片段（Fab或scFv）與魚(yú)精蛋白構(gòu)建成融合蛋白，通過(guò)魚(yú)精蛋白的正電荷偶聯(lián)帶負(fù)電荷的寡核苷酸，形成抗體偶聯(lián)寡核苷酸（antibody-oligonucleotide conjugates）。

優(yōu)點(diǎn)是簡(jiǎn)單，靈活；且寡核苷酸進(jìn)入細(xì)胞，多陽(yáng)離子復(fù)合物可充當(dāng)溶酶體逃逸劑。在溶酶體中，多陽(yáng)離子復(fù)合物充當(dāng)質(zhì)子海綿，氯離子在內(nèi)部擴(kuò)散以補(bǔ)償電荷不平衡，導(dǎo)致滲透膨脹，形成泄漏膜。這種溶酶體逃逸很重要，因?yàn)楣押塑账釠](méi)有強(qiáng)的膜通透性。

缺點(diǎn)是離子相互作用是可逆的、不穩(wěn)定的；且難以確定OAR值 (oligonucleotide to antibody ratios)。

親和性連接

通過(guò)Avidin/Streptavidin?Biotin偶聯(lián)：將硫醇修飾的DNA化學(xué)連接到馬來(lái)酰亞胺激活的鏈霉親和素上，生成鏈霉親和素-DNA，進(jìn)一步與各種生物素化蛋白非共價(jià)連接。主要應(yīng)用于免疫檢測(cè)方法開(kāi)發(fā)。進(jìn)一步發(fā)展，直接利用鏈霉親和素的四個(gè)生物素結(jié)合位點(diǎn)，將生物素化的抗體和生物素化的寡核苷酸直接相連。

直接連接（直接偶聯(lián)）

直接偶聯(lián)方法更類(lèi)似于ADC藥物的偶聯(lián)策略。將一個(gè)可連接的基團(tuán)添加到寡核苷酸上，并直接偶聯(lián)到抗體的賴(lài)氨酸、半胱氨酸上。連接子可以使用可裂解Linker 或者不可裂解Linker，通過(guò)定點(diǎn)偶聯(lián)等方式。

優(yōu)點(diǎn)是連接子更小，更穩(wěn)定；另外寡核苷攜帶連接子需要的搭手 (handhold)，經(jīng)過(guò)化學(xué)修飾可以與連接子相連。連接子必須存在于DNA或RNA，雙鏈退火過(guò)程中穩(wěn)定。

缺點(diǎn)是不含溶酶體逃逸劑，因此可能會(huì)導(dǎo)致寡核苷酸從溶酶體中緩慢逃逸，從而影響AOC的活性。

核酸雙鏈雜交結(jié)合

一條單鏈寡核苷酸首先偶聯(lián)到抗體上，另一條互補(bǔ)鏈通過(guò)雜交方式偶聯(lián)，形成一個(gè)雙鏈AOC。雙鏈雜交方法， 長(zhǎng)度很重要。太短，形成的雜交鏈不穩(wěn)定，太長(zhǎng)則容易形成2級(jí)結(jié)構(gòu)。這種雜交技術(shù)在診斷方面非常有應(yīng)用前景，但用于治療藥物，工藝挑戰(zhàn)大。

小核酸抗體偶聯(lián)藥物(AOC)的優(yōu)勢(shì)

將抗體藥物的組織特異性?xún)?yōu)勢(shì)與小核酸的靶點(diǎn)特異性?xún)?yōu)勢(shì)相結(jié)合，解決目前小核酸藥物僅能通過(guò)LNP（脂質(zhì)納米顆粒）、GalNAc（N-乙酰半乳糖胺）遞送系統(tǒng)靶向肝臟的問(wèn)題，因此具備廣闊的發(fā)展空間。優(yōu)勢(shì)可概況為：1、具有靶向性，增加生物利用度，減少毒作用；2、提高穩(wěn)定性，增加理想半衰期，提高有效性。

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參考文獻(xiàn)