美迪西生物醫(yī)藥在重組蛋白表達(dá)與純化服務(wù)方面有10余年經(jīng)驗(yàn)積累，美迪西生物醫(yī)藥擁有多種蛋白表達(dá)協(xié)同，包括原核蛋白表達(dá)系統(tǒng)、酵母蛋白表達(dá)系統(tǒng)、昆蟲細(xì)胞蛋白表達(dá)系統(tǒng)（桿狀病毒）哺乳動(dòng)物細(xì)胞蛋白表達(dá)系統(tǒng)，具備多種融合技術(shù)，可以為你在蛋白表達(dá)與純化方面提供多種選擇。從方案設(shè)計(jì)、基因優(yōu)化、表達(dá)條件優(yōu)化到純化的技術(shù)體系，以提高您的目的蛋白表達(dá)水平。

美迪西蛋白表達(dá)系統(tǒng)包括原核蛋白表達(dá)系統(tǒng)（大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)）、酵母蛋白表達(dá)系統(tǒng)、昆蟲細(xì)胞蛋白表達(dá)系統(tǒng)(桿狀病毒表達(dá))、哺乳動(dòng)物細(xì)胞蛋白表達(dá)系統(tǒng)，美迪西生物醫(yī)藥提供多種重組蛋白系統(tǒng)供你選擇，可以從價(jià)格、周期、優(yōu)劣勢(shì)等方面靈活選擇，滿足你不同的科研需求。

蛋白表達(dá)純化服務(wù)包括密碼子優(yōu)化、基因合成、表達(dá)載體的構(gòu)建、小規(guī)模的蛋白表達(dá)與純化和大規(guī)模的蛋白表達(dá)與純化等。大量純化的重組蛋白可用于藥物篩選、結(jié)構(gòu)生物學(xué)研究、細(xì)胞生物學(xué)研究、蛋白質(zhì)組學(xué)等的一系列生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的研究。其中原核蛋白表達(dá)系統(tǒng)是迄今為止最為成熟可靠的蛋白表達(dá)系統(tǒng)，能快速表達(dá)純化各種不同來源的蛋白。美迪西生物醫(yī)藥已成功構(gòu)建完整的大腸桿菌原核和酵母細(xì)胞真核的蛋白表達(dá)技術(shù)平臺(tái)，并可以根據(jù)客戶的需求，提供從蛋白表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建、蛋白表達(dá)條件摸索和蛋白純化等一整套服務(wù)。

蛋白純化的原則

首先，必須了解待純化樣品中目的蛋白及主要雜質(zhì)的性質(zhì)，盡可能多收集有關(guān)蛋白質(zhì)的來源、性質(zhì)（分子大小、等電點(diǎn)）和穩(wěn)定性（蛋白質(zhì)對(duì)溫度、極端PH、蛋白酶、氧和金屬離子等的耐受性）等信息，這有助于設(shè)計(jì)蛋白質(zhì)純化。

其次，純化開始之前必須了解最終產(chǎn)品的用途，從而設(shè)計(jì)蛋白質(zhì)純化過程，同時(shí)要綜合考慮純化產(chǎn)品的質(zhì)量、數(shù)量和經(jīng)濟(jì)性等三個(gè)方面的要求。純化后的蛋白質(zhì)純度要多高，純化過程中能允許損失多少活性以及純化過程需多少時(shí)間和成本等都受到目的蛋白用途的影響。目的蛋白純度如果要求越高，往往所需要的操作時(shí)間越長，成本越高。

最后，充分了解各分離純化技術(shù)操作單元的大量信息也很重要，比如在細(xì)胞破碎時(shí)，需要了解包括流速、攪拌器類型、操作壓力、細(xì)胞濃度和種類、產(chǎn)品釋放的碎片和大小等；設(shè)計(jì)分析吸附色譜時(shí)，要了解包括色譜柱特征、凝膠或其他吸附劑的性能 （結(jié)合能力、解離常數(shù)、流速等）。

蛋白純化方法

蛋白純化方法的選擇和確定要根據(jù)不同蛋白質(zhì)樣品的性質(zhì)和具體的研究目的來決定。常用于初步提取和濃縮蛋白質(zhì)的方法主要有吸附法、超濾法、沉淀法（如鹽析、有機(jī)溶劑沉淀、等電點(diǎn)沉淀和選擇性沉淀等）、透析法等。在要求高分辨率的條件下，通常采用色譜法（如凝膠過濾、離子交換、親和色譜和共價(jià)色譜等）和電泳法（如等電聚焦、雙向電泳、毛細(xì)管電泳和免疫電泳等）。這些分離純化方法的原理主要是基于蛋白質(zhì)在溶解性、帶電荷性、分子量大小或親和特異性等方面的差異。色譜技術(shù)和電泳技術(shù)在純化蛋白質(zhì)方面的研究和應(yīng)用比較廣泛、深入。

常用蛋白純化技術(shù)介紹

目前，離子交換色譜已成為蛋白質(zhì)分離純化中最常用的手段，統(tǒng)計(jì)顯示，在蛋白質(zhì)的純化方案中，使用到離子交換色譜的占75%，其次是使用親和色譜和凝膠過濾色譜，分別占60%和50%。事實(shí)上，蛋白質(zhì)的純化過程往往是將若干純化技術(shù)聯(lián)合使用而實(shí)現(xiàn)的，在此過程中，選擇合理的純化技術(shù)固然很重要，然而如何將這些技術(shù)合理的組合和按順序使用也是進(jìn)行成功分離所必須考慮的。

1、凝膠過濾色譜

凝膠過濾色譜技術(shù)是蛋白質(zhì)研究領(lǐng)域內(nèi)一種高效的分離純化手段。一方面從理論上講，蛋白質(zhì)樣品在凝膠柱內(nèi)幾乎和固定相基質(zhì)不發(fā)生任何作用，另一方面樣品洗脫液均為含鹽或純水系緩沖液，而且整個(gè)操作過程中洗脫液組成不發(fā)生變化，所以該技術(shù)在分離純化蛋白質(zhì)時(shí)具有操作方便、洗脫條件溫和、重復(fù)性好、不需要有機(jī)溶劑、樣品不易變性和回收率高等諸多優(yōu)點(diǎn)。

主要應(yīng)用：用于蛋白質(zhì)的濃縮純化，分子量及其分布范圍測(cè)定，樣品脫鹽以及更換蛋白質(zhì)緩沖液等。

主要考慮因素：凝膠的參數(shù)、體積參數(shù)、分配系數(shù)和有效分配系數(shù)、

2、離子交換色譜

用離子交換色譜分離生物分子的基礎(chǔ)是待分離物質(zhì)在特定條件下與離子交換劑帶相反電荷因而能夠與之競爭結(jié)合，而不同的分子在此條件下帶電荷的種類、數(shù)量及電荷的分布不同，表現(xiàn)出與離子交換劑在結(jié)合強(qiáng)度上的差異，在離子交換色譜時(shí)按結(jié)合力由弱到強(qiáng)的順序被洗脫下來而得以分離。

離子交換色譜的特點(diǎn)：

①分辨率高，隨著各種高效色譜介質(zhì)的出現(xiàn)，選擇合適的離子交換劑能夠確 保 離 子交換色譜有著良好的選擇性和分辨率；

②蛋白交換容量高，有利于放大分離規(guī)模和在工業(yè)生產(chǎn)中應(yīng)用，而這一點(diǎn)是凝膠 過 濾 等 方 法 很 難 達(dá) 到 的；

③ 應(yīng) 用 靈活，通過選擇不同的離子交 換 劑，控制緩沖液的組成和 ｐＨ、離子強(qiáng)度條件可以優(yōu)化分離過程；

④分離原理比較明確，該技術(shù)是依據(jù)電荷不同進(jìn)行分離的，不過對(duì)于蛋白質(zhì)這樣的大分子，除了靜電作用外，疏水相互作用、氫鍵等非離子作用以及緩沖離子的性質(zhì)也會(huì)影響到分離行為；

⑤操作簡單易行，在 大 規(guī)模分離樣品而分辨率要求又并不高時(shí)，對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行吸附和解吸甚至可以不用在色譜柱中進(jìn)行。

3、親和色譜

親和色譜是利用蛋白質(zhì)分子的生物學(xué)活性，而不是利用其物化特性來進(jìn)行分離，即以蛋白質(zhì)和配體之間的特異性親和力作為分離的基礎(chǔ)，因而具有高度選擇性，其純化程度有時(shí)可高達(dá)1000倍以上，因此親和色譜是一種非常有效的蛋白質(zhì)純化方法，多用于從大量的復(fù)雜溶液中分離少量的特定蛋白質(zhì)，且這種純化方法同時(shí)具有濃縮的效果。有時(shí)僅用親和色譜一步分離過程，就能達(dá)到快速而且滿意的蛋白質(zhì)純化效果，這是其他純化方法所無法比擬的。

親和色譜中蛋白質(zhì)與配體之間的結(jié)合類型主要有：酶的活性中心或別構(gòu)中心通過次級(jí)鍵與專一性底物、輔酶、激活劑或抑制劑結(jié)合，抗原與抗體，激素等與其受體，生物素與抗生物素蛋白／鏈霉抗生物素蛋白，糖蛋白與凝集素等的結(jié)合。

4、共價(jià)色譜

用來分離蛋白質(zhì)和其他生物大分子的色譜技術(shù)，如離子交換色譜和疏水相互作用色譜都是基于待分離的分子和吸附劑之間的非共價(jià)相互作用而實(shí)現(xiàn)的，而共價(jià)色譜則是應(yīng)用固定相與溶質(zhì)之間共價(jià)鍵的形成或斷裂來實(shí)現(xiàn)分離。

通常用于生物活性蛋白的色譜技術(shù)，要求在溫和的條件下，既能形成穩(wěn)定的鍵，又能在釋放固定蛋白時(shí)不破壞其結(jié)構(gòu)。

5、電泳技術(shù)

電泳就是在電場作用下，帶電膠體顆粒向著與其電性相反的電極移動(dòng)，其分離原理是基于生物大分子的電荷密度。

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