基因毒性雜質(zhì)是指可能對(duì)生物體細(xì)胞的遺傳物質(zhì)（DNA或RNA）造成損害的化合物或物質(zhì)。這些雜質(zhì)可能導(dǎo)致基因突變、染色體畸變、DNA斷裂等不良影響，進(jìn)而影響細(xì)胞的正常功能和生長(zhǎng)，甚至引發(fā)癌癥等疾病。近年對(duì)基因毒性雜質(zhì)的重視持續(xù)提升，引發(fā)了更多關(guān)于基因毒性雜質(zhì)的研究和探討。在新藥研發(fā)的過(guò)程中，基因毒性雜質(zhì)是我們不得不面對(duì)一個(gè)重要的問題。對(duì)其進(jìn)行充分的研究和評(píng)估至關(guān)重要，可以保障患者安全，提高藥物品質(zhì)，符合監(jiān)管要求，是新藥研發(fā)中的關(guān)鍵步驟之一。

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01 可以用mini-Ames 試驗(yàn)代替Ames試驗(yàn)嗎？

畢增：按照我們的經(jīng)驗(yàn)，在IND申報(bào)階段，雜質(zhì)使用mini-Ames試驗(yàn)可作為正式Ames試驗(yàn)的替代材料進(jìn)行申報(bào)。然而，在新藥上市申報(bào)和仿制藥上市申報(bào)時(shí)應(yīng)該采用標(biāo)準(zhǔn)Ames試驗(yàn)，要注意M7（R2）的注釋2所說(shuō)的微量化測(cè)試并不是指mini-Ames試驗(yàn)，是指待測(cè)化合物數(shù)量有限不能使用符合指導(dǎo)原則的試驗(yàn)濃度時(shí)可以采取的措施。

02 仿制藥研發(fā)，每個(gè)雜質(zhì)都需要進(jìn)行軟件評(píng)估嗎？

畢增：是的，M7（R2）問答中明確建議對(duì)所有雜質(zhì)進(jìn)行模擬和評(píng)估。通過(guò)我直播中分享的案例，可以看到一些化合物，即使沒有基因毒性警示結(jié)構(gòu)，也可能具有基因毒性。因此，即使某些化合物不在我們的警示結(jié)構(gòu)列表中，仍需對(duì)其進(jìn)行評(píng)估，因?yàn)樗鋵?shí)也是可能有基因毒性的。

03 如果有Ames試驗(yàn)數(shù)據(jù)，還需要進(jìn)行軟件評(píng)估嗎？

畢增：需要根據(jù)情況而定。如果數(shù)據(jù)庫(kù)收錄的Ames試驗(yàn)是不是符合OECD指導(dǎo)原則或ICH S2的標(biāo)準(zhǔn)Ames試驗(yàn)，即是否使用了5種菌株，并且在有代謝激活和沒有代謝激活兩種途徑下都進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)，并且試驗(yàn)應(yīng)該是符合GLP規(guī)范的，在滿足以上前提的情況下，Ames試驗(yàn)Negative，那么就無(wú)需進(jìn)行軟件評(píng)估，但是需要進(jìn)行比較全面的數(shù)據(jù)庫(kù)檢索。

04 是在藥品研發(fā)的哪個(gè)階段評(píng)估呢？

畢增：根據(jù)我的理解，需要根據(jù)每個(gè)項(xiàng)目的具體情況進(jìn)行分析。我的建議是，在工藝穩(wěn)定后，例如工藝路線已經(jīng)確定并且優(yōu)化工作已經(jīng)完成后，在小試生產(chǎn)階段同步開展評(píng)估。在這個(gè)階段，通常不會(huì)對(duì)之前的工藝進(jìn)行大幅調(diào)整，除非在后續(xù)放大過(guò)程中發(fā)現(xiàn)了一些問題，例如放大效應(yīng)導(dǎo)致雜質(zhì)超標(biāo)或者收率較大幅度的。一般情況下，建議在小試驗(yàn)階段進(jìn)行相應(yīng)的評(píng)估。這樣可以提前進(jìn)行方法開發(fā)和簡(jiǎn)單確認(rèn)工作，并且隨著逐步放大的過(guò)程，積累數(shù)據(jù)，為后續(xù)的雜質(zhì)控制策略提供數(shù)據(jù)支持。

05 Case ultra 預(yù)測(cè)合規(guī)嗎？CDE老師認(rèn)可代替AMES實(shí)驗(yàn)嗎？

畢增：這個(gè)是合規(guī)的，可以放心。因?yàn)槲覀兺瓿傻亩鄠€(gè)仿制藥項(xiàng)目，包括新藥的IND申報(bào)，還是客戶委托完成的發(fā)補(bǔ)的雜質(zhì)預(yù)測(cè)，都有使用 Case ultra進(jìn)行預(yù)測(cè)，都是沒有問題的。

Case ultra有Statistical Model（GT1_BMUT）統(tǒng)計(jì)學(xué)模型，該模型是通過(guò)RCA協(xié)議與美國(guó)FDA合作開發(fā)和驗(yàn)證的模型，訓(xùn)練集中包含13760個(gè)化合物；同時(shí)有Expert Rule Model（GT_EXPERT）專家規(guī)則模型，參考數(shù)據(jù)集中有17309個(gè)化合物作為參考數(shù)據(jù)集用于驗(yàn)證規(guī)則。警示結(jié)構(gòu)的數(shù)量有240個(gè)，包含普通的陽(yáng)性警示結(jié)構(gòu)，陽(yáng)性減弱和陽(yáng)性增強(qiáng)的子類型以及全局的陽(yáng)性減弱的警示結(jié)構(gòu)。

Case ultra可以滿足ICH M7同時(shí)使用兩種模型對(duì)化合物進(jìn)行預(yù)測(cè)的要求，并且所有的模型都是進(jìn)行過(guò)嚴(yán)格驗(yàn)證的，可以查看后臺(tái)數(shù)據(jù)，可以查看警示結(jié)構(gòu)和相關(guān)細(xì)節(jié)，擁有明確的算法和良好的預(yù)測(cè)透明度，符合OECD的相關(guān)規(guī)則。

06 三氟甲磺酸那個(gè)案例中樣品本身就有三氟甲磺酸，這個(gè)水解方式還能行嗎？

畢增：這個(gè)案例是由于在方法開發(fā)初期，我們對(duì)API進(jìn)行了三氟甲磺酸的檢測(cè)，并未檢出該雜質(zhì)?；谶@個(gè)結(jié)果，我采用這種檢測(cè)方法，如果樣品中本身就有三氟甲磺酸檢出，則會(huì)導(dǎo)致雜質(zhì)被高估，這種情況下可以檢測(cè)水解后生成的另一個(gè)片段，比如說(shuō)在案例中的3-羥基-2-硝基吡啶。

07 雜質(zhì)的軟件評(píng)估都可以使用哪些軟件？

畢增：除了Case Ultra之外，Derek和Sarah也是同樣優(yōu)秀的商業(yè)預(yù)測(cè)軟件。當(dāng)然，除了商業(yè)軟件外，也有一些免費(fèi)的軟件，比如VEGA GUI，我個(gè)人使用過(guò)該軟件，預(yù)測(cè)的結(jié)果并不明確。可能是因?yàn)檐浖采w的的數(shù)據(jù)庫(kù)相對(duì)較小，覆蓋的化合物種類也有限，導(dǎo)致用于訓(xùn)練軟件算法的化合物數(shù)量較少，從而影響了計(jì)算結(jié)果的可靠性，合規(guī)性方面有較大的挑戰(zhàn)，大家使用這類軟件的時(shí)候還是要慎重一些。

08 臨床上單次使用的局部給藥制劑中有一個(gè)雜質(zhì)超過(guò)了界定限度，要做哪些安全性評(píng)價(jià)？

畢增：對(duì)于制劑中超過(guò)界定限度的雜質(zhì)，建議按照ICH Q3B（R2）的附件3-降解產(chǎn)物鑒定和界定決策樹進(jìn)行研究，首先要確定該雜質(zhì)是否能降低至小于等于界定限，如果不能的話則考慮根據(jù)患者人群、用藥時(shí)間進(jìn)行以下研究：致突變性研究（點(diǎn)突變、染色體畸變）、一般毒性研究（單個(gè)種類，通常14至90天）或者酌情考慮是否開展其他的毒性終點(diǎn)試驗(yàn)。

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