美迪西細(xì)菌內(nèi)毒素檢測(cè)試驗(yàn)

2016-06-07

訪問量：

細(xì)菌內(nèi)毒素試驗(yàn)流程

? 細(xì)菌內(nèi)毒素方法開發(fā)（樣品量 3 瓶/批，一個(gè)批次）
? 細(xì)菌內(nèi)毒素方法驗(yàn)證(樣品量 3 瓶/批，三個(gè)批次)
? 細(xì)菌內(nèi)毒素測(cè)試(樣品量 3 瓶/批，三個(gè)批次)

? 細(xì)菌內(nèi)毒素是革蘭氏陰性細(xì)菌細(xì)胞壁的組分之一：LPS
? 在細(xì)菌死亡后釋放

細(xì)菌內(nèi)毒素特點(diǎn)：耐熱性、耐熱性、高致熱性

細(xì)菌內(nèi)毒素實(shí)驗(yàn)涉及內(nèi)容及相關(guān)要求

? 人員：
? 試劑、耗材
? 儀器
? 試驗(yàn)環(huán)境

細(xì)菌內(nèi)毒素檢查方法包括：凝膠法（限度實(shí)驗(yàn)、半定量實(shí)驗(yàn)）、光度測(cè)定法（濁度法、顯色基質(zhì)法）?？墒褂闷渲腥魏我环N方法進(jìn)行試驗(yàn)。當(dāng)測(cè)定結(jié)果有爭(zhēng)議時(shí)，除另有規(guī)定外，以凝膠法結(jié)果為準(zhǔn)。

①細(xì)菌內(nèi)毒素檢查——凝膠法

凝膠法系利用細(xì)菌內(nèi)毒素與鱟試劑反應(yīng)可形成凝膠的原理，來測(cè)定供試品中的內(nèi)毒素含量是否符合規(guī)定。
干擾作用：
? 大部分的干擾作用都可以通過使用細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水稀釋供試品的方法排除。
? 當(dāng)有些干擾作用僅使用稀釋法不能排除時(shí)，可采用其他方法消除干擾因素，然后再進(jìn)行試驗(yàn)。

檢查法——凝膠限度試驗(yàn)
? 限值的確定及最大有效稀釋倍數(shù)（MVD）的計(jì)算
? 供試品溶液的制備
? 檢查法——限度實(shí)驗(yàn)

可疑結(jié)果處理程序
處理程序
? 實(shí)驗(yàn)人員首先對(duì)實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目進(jìn)行回顧：
? 1.檢驗(yàn)用標(biāo)準(zhǔn)
? 2.檢驗(yàn)操作
? 3.記錄和計(jì)算
? 4.儀器狀態(tài)
? 5.標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)
? 6.試劑質(zhì)量
? 7.其他異?，F(xiàn)象（是否有可能存在污染，環(huán)境、器械…）
? 復(fù)核人員進(jìn)行復(fù)核
? 若發(fā)現(xiàn)檢驗(yàn)人員檢驗(yàn)過程存在異常，復(fù)核人員以正確的檢驗(yàn)過程重復(fù)實(shí)驗(yàn)一次，以取代最初的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
? 若未發(fā)現(xiàn)檢驗(yàn)人員檢驗(yàn)過程存在異常，為了確定不合格結(jié)果是否由測(cè)試或分析誤差原因造成，復(fù)核人員可重復(fù)實(shí)驗(yàn)。
? 排除假陽性干擾（葡聚糖類物質(zhì)）!抗增液、特異性鱟試劑
? 定量試驗(yàn)提供數(shù)據(jù)參考
? 不同鱟試劑的使用

②細(xì)菌內(nèi)毒素檢查——光度測(cè)定法

光度測(cè)定法系利用檢測(cè)鱟試劑與內(nèi)毒素反應(yīng)過程中發(fā)生的濁度或色度的變化而測(cè)定內(nèi)毒素含量的方法。
4種檢測(cè)方法：終點(diǎn)濁度法、動(dòng)態(tài)濁度法、終點(diǎn)顯色法、動(dòng)態(tài)顯色法
光度法本質(zhì)：使用內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)制備標(biāo)準(zhǔn)曲線，反求出樣品中的內(nèi)毒素含量值。
光度測(cè)定法實(shí)驗(yàn)部分：標(biāo)準(zhǔn)曲線的可靠性實(shí)驗(yàn)、干擾實(shí)驗(yàn)、檢查法