上海美迪西的生物部在體外生物學領域有豐富廣泛的經(jīng)驗，通過酶水平測定、細胞水平測定、細胞生物學、生物化學、體外同位素測定、穩(wěn)定細胞株建立、基因敲除、RNAi和MicroRNA技術等，提供一套完整的生物學服務。

美迪西酶水平測定服務項目

多種技術平臺

多樣性靶點和應用

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酶活性又稱酶活力，是指酶催化制定化學反應的能力。酶活力可以用一定條件下每次反應的速度來表示。反應速度愈快，就表明給定的酶溶液或組織提取液中的酶活力愈高。

酶活性的測定方法

根據(jù)酶促反應時間的選擇不同，分為固定時間法和連續(xù)監(jiān)測法。
①固定時間法：測定酶促反應開始后一段時間內底物的減少量或產(chǎn)物的增加量。優(yōu)點：簡單 缺點：難以確定反應時間段酶促反應是否處于線性期。
②連續(xù)檢測法：測定底物或產(chǎn)物隨時間的變化量，也稱為速率法。優(yōu)點：能動態(tài)觀測酶促反應進程，可以明顯找到反應的線性期，結果準確可靠，標本和試劑用量少，可在較短時間內完成測定。缺點：對環(huán)境要求高，要求能夠精確地控制溫度、PH值和底物濃度等反應條件，要求儀器具有恒溫裝置及自動檢測功能。

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酶活性測定的原理

酶活性測定的原理是通過直接測定反應生成物的濃度變化，以單位時間內反應物的減少量或生成物的增加量來表示酶促反應速率。

酶活性測定方法

常見的酶活性測定方法包括耦合反應法、化學測定法、放射同位素法、測壓法、電極法和高效液相色譜法（HPLC）等。

影響酶活性測定的因素

①酶濃度
通常使底物過量，以確保酶可以充分與底物結合并發(fā)揮其催化功能。
②底物、輔因子的種類和濃度
1. 選擇合適的底物種類和濃度:
如果所測的酶專一性不強，可作用于多種底物，首先就需決定選擇哪一類底物作為測此酶的底物。確定底物種類后，重要的問題是選擇底物的合適濃度。
2. 輔因子、活化劑的種類和濃度:
從廣義上說，凡能促進酶及反應物進入活化狀態(tài)從而加速酶催化反應的物質都能稱為輔因子，其種類繁多。
③反應體系的最適pH、緩沖液的種類和濃度
在酶反應的其它條件不變的情況下，在不同pH下可得各種類型的酶活性與pH關系，將酶活性最高處的pH稱為最適pH 。
緩沖液含有大量離子，或影響酶蛋白的構型，或影響底物的解離程度等等，從而影響酶活性。
④溫度的控制
測定酶時都需要酶和底物在一定溫度下作用一段時間，在此期間，溫度有可能使酶失活，不同酶在此方面差異很大，目前常規(guī)工作實驗室越來越多的使用37℃，溫度升高，反應速度快，靈敏度高。
不論選用何種溫度測酶，由于酶反應受溫度影響很大，在測定時間內，反應體系的溫度變化應控制在±0.1℃內。應用國產(chǎn)普通恒溫水浴箱來測酶活性是不合適的，應使用帶有攪拌器的高級恒溫水浴。
⑤其它影響酶活性因素
在其他影響因素中，對酶活性測定影響最大的是抑制劑的作用。

酶活性檢測實驗設計和注意事項

平行試驗： 在酶活性測定中，為了消除系統(tǒng)和操作誤差，每次測定均需設置正常和異常對照，待測樣品應設置雙份，取其結果的平均值，并結合本實驗室的正常值和對照管的結果進行綜合分析。通常選用易失活的酶作為參考酶進行同步測定，只有當參考酶活性正常時，才能確認所得結果可靠，從而排除假陽性。
防止酶失活： 這是實驗穩(wěn)定性和成功的關鍵。在細胞分離、超聲破碎、離心等操作過程中，應全程保持在4°C條件下進行，標本采集后需立即處理。

酶活性測定反應終止方法

①通過改變pH值使蛋白質變性沉淀
②急熱100度
③使用1% SDS中止反應，注意protease K等在SDS下仍有活性。
④對于金屬離子參與的反應，可加入EDTA終止
⑤加入抑制劑
⑥在放射性測定中，可加入大量非放射性底物以終止反應。

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