凝血體外研究

抗凝血以及促凝血類藥物的藥物研發(fā)對于包括心血管疾病在內(nèi)的血栓與出血性疾病的治療非常重要。而篩選抗凝血及促凝血藥物的體外平臺在其早期藥物發(fā)現(xiàn)過程中起到至關(guān)重要的作用，美迪西提供凝血途徑的體外研究研究，其藥物發(fā)現(xiàn)平臺為客戶提供高質(zhì)量的篩選數(shù)據(jù)，為藥物構(gòu)效關(guān)系研究提供支持。

凝血機(jī)制的正常運(yùn)行需要很多蛋白的相互作用，我們把參與凝血過程的各種蛋白統(tǒng)稱為凝血因子。目前已知的有15種凝血因子，包括經(jīng)典凝血因子I-XIII除去VI的12個因子和激肽系統(tǒng)的2個因子及vwf。凝血因子的最終結(jié)果是促使纖維蛋白原變?yōu)槔w維蛋白，其多數(shù)屬于絲氨酸蛋白酶。
I因子是纖維蛋白原，II因子是凝血酶原，III因子是組織因子，IV因子是鈣離子，V因子是易變因子，VII因子是前轉(zhuǎn)變素，VIII是抗血友病因子A，IX是抗血友病因子B，X是stuart因子，XI是血漿凝血激酶前質(zhì)，XII是接觸因子，XIII是纖維蛋白穩(wěn)定因子。
傳統(tǒng)的凝血瀑布認(rèn)為血液凝血過程是由內(nèi)源性途徑、外源性途徑和共同途徑組成。
內(nèi)源凝血途徑是指因子XII被激活形成IXa-VIIIa-Ca2+-PL復(fù)合物，進(jìn)而激活X因子。
外源凝血途徑是TF的釋放形成TF-VIIa- Ca2+復(fù)合物激活X因子。共同途徑是形成的激活的Xa因子和Va因子結(jié)合激活凝血酶進(jìn)而使纖維蛋白原轉(zhuǎn)變?yōu)槔w維蛋白。
圖1 凝血通路機(jī)制圖
圖2 常見抗凝靶點(diǎn)
隨著認(rèn)識的深入，對傳統(tǒng)的凝血瀑布加以修正和補(bǔ)充，凝血過程并不是以內(nèi)源性為主，而是主要通過組織因子途徑激活。凝血的維持需要VIII和IX因子的參與。此外凝血過程受到TFPI和其他抗凝蛋白的調(diào)控。VIIa-TF復(fù)合物也能同時激活I(lǐng)X因子，凝血的激活XII和XI是非必須的，同時Zn2+和Mg2+也參與了凝血過程。所以凝血激活的新模式認(rèn)為開始階段通過TF釋放形成少量的凝血酶后，凝血酶進(jìn)一步激活血小板、VIII、V因子使得凝血過程放大和加快。
凝血機(jī)制的調(diào)節(jié)通過各種酶及復(fù)合物，其主要發(fā)揮作用的是凝血酶，凝血酶形成后的作用至少包括五個方面：啟動、放大、血塊的終止和清除、修復(fù)。凝血系統(tǒng)在發(fā)揮作用過程中需要抗凝系統(tǒng)的平衡才會維持正常的血液流動。

美迪西案例

案例一：檢測FXIa和 FVIIa對BeneFⅨ? 的激活作用
BeneFⅨ?注射用重組人凝血因子Ⅸ是一種人造蛋白質(zhì)，可用于治療和預(yù)防血友病B （先天性凝血因子Ⅸ缺乏癥或Christmas氏?。┗颊叱鲅贿€可用于血友病B患者的圍手術(shù)期處理。該藥物不適用于治療A型血友病VIII因子缺乏癥的人。
案例二：Novoseven激活FX及與ATIII的親和力檢測
Novoseven注射用重組人凝血因子VIIa適應(yīng)癥為用于下列患者群體的出血發(fā)作及預(yù)防在外科手術(shù)過程中或有創(chuàng)操作中的出血：
凝血因子Ⅷ或Ⅸ的抑制物>5BU的先天性血友病患者；預(yù)計(jì)對注射凝血因子Ⅷ或凝血因子Ⅸ，具有高記憶應(yīng)答的先天性血友病患者；獲得性血友病患者；先天性FⅦ缺乏癥患者；具有GPⅡb-Ⅲa和/或HLA抗體和既往或現(xiàn)在對血小板輸注無效或不佳的血小板無力癥患者。
案例三：BAY2433334選擇性抑制XIa因子的檢測
XI因子是血液中的一種蛋白質(zhì)，在凝血級聯(lián)反應(yīng)中被轉(zhuǎn)化為活性酶形式因子XIa。XI因子是開發(fā)更安全抗凝藥有希望的差異化靶點(diǎn)，因其在病理性和正常血栓形成轉(zhuǎn)化中發(fā)揮關(guān)鍵作用，能夠解耦止血與血栓形成。先天性XI因子遺傳缺陷（血友病C）的患者靜脈血栓栓塞和缺血性卒中的風(fēng)險(xiǎn)較低，但很少有自發(fā)性出血。
拜耳研發(fā)的Asundexian（BAY2433334）是一種口服XIa因子抑制劑，可直接、有效、可逆地結(jié)合FXIa的活性位點(diǎn),從而抑制其活性。用于非心源性缺血性卒中患者的二級預(yù)防，以及房顫（心律不齊）和近期心梗（心臟病發(fā)作）的治療。Asundexian對XIa因子的抑制作用被認(rèn)為可以在不增加出血風(fēng)險(xiǎn)的基礎(chǔ)上降低血栓事件。
我司分別檢測了BAY2433334對FXIa，F(xiàn)VIIa，F(xiàn)Xa，F(xiàn)XIIa，Thrombin，Trypsin，Plasmin，TPA， Urokinase，Plasma Kallikren， Chymotrypsin，Activated protein C and TAFIa的抑制效果，結(jié)果如下圖所示，可見BAY2433334可以選擇性的抑制XIa因子。